应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助，想直接换掉构建好的载体上的目的基因，听说有一种融合的技术，不需酶切？
91/1返回列表
查看: 1334  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

erin090506

新虫 (小有名气)

[求助] 求助，想直接换掉构建好的载体上的目的基因，听说有一种融合的技术，不需酶切？ 已有2人参与

求助大家，我手里有一个构建好的载体，想直接换掉目的基因，但是测序后发现基因前后片段很小，没有酶切位点。
是不是有一种通过PCR，融合技术换掉载体上目的基因的方法，应该怎么操作，有没有相关的文献推荐。谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
实实在在做科研
1楼 2015-08-24 11:20:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
erin090506: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-25 10:27:20
你又没提前设置gateway位点，老老实实酶切连接吧，那个快

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-24 12:03:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
erin090506: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2015-08-25 10:27:42
无缝克隆，现在国产的很多。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-08-24 22:44:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

erin090506

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-08-24 12:03:24
你又没提前设置gateway位点，老老实实酶切连接吧，那个快

又一次涨知识了。都没有听说过gateway位点。谢谢这位大侠
赞一下 回复此楼
实实在在做科研
4楼2015-08-25 10:29:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mao081312

铁虫 (小有名气)
无缝克隆也需要切开载体的，如果你载体上没有酶切位点，就只有重来了
赞一下 回复此楼
5楼2015-08-28 12:30:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

那雨那女孩

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by mao081312 at 2015-08-28 12:30:18
无缝克隆也需要切开载体的，如果你载体上没有酶切位点，就只有重来了

大神！求帮忙！！！我载体上有酶切位点，但载体有5Kb,目的基因有1Kb,无缝连接能连接起来吗？？？？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
辟邪
6楼2016-01-17 23:32:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mao081312

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 那雨那女孩 at 2016-01-17 23:32:42
大神！求帮忙！！！我载体上有酶切位点，但载体有5Kb,目的基因有1Kb,无缝连接能连接起来吗？？？？
...

可以的，这种比例很常见的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
7楼2016-01-17 23:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

那雨那女孩

新虫 (小有名气)
啊，太谢谢了！！！我还有不懂的地方，就是，我的载体是用酶切的，粘性末端只有6个，但是，设计引物的时候，要与载体重复15bp左右，还有9个左右的碱基是多出来的，我就想问，无缝连接是沿载体复制一圈呢，还是只复制目的基因部分，然后与线性载体相连？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
辟邪
8楼2016-01-18 00:04:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

那雨那女孩

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mao081312 at 2016-01-17 23:53:25
可以的，这种比例很常见的
...

太谢谢了！！！我还有不懂的地方，就是，我的载体是用酶切的，粘性末端只有6个，但是，设计引物的时候，要与载体重复15bp左右，还有9个左右的碱基是多出来的，我就想问，无缝连接是沿载体复制一圈呢，还是只复制目的基因部分，然后与线性载体相连？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
辟邪
9楼2016-01-18 01:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 erin090506 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +4 西山十月 2026-08-09 6/300 2026-08-10 00:16 by liufeng0619
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 14/700 2026-08-09 23:33 by Tide man
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭