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无忌2013

金虫 (正式写手)

[求助] 质粒转染和扩增

大家好,请教个问题:最近做了质粒扩增和转染,瞬转稳转都做了,瞬转48h后跑蛋白发现和空质粒组比较没有高表达,检查发现质粒扩增时加错了抗生素(应该是大观霉素,但是加了卡那霉素),那么会因为加错抗生素杀死带目的质粒的菌导致的实验失败吗?求各位前辈知道一二,非常感谢
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for5

木虫 (正式写手)

那你质粒扩增加错抗生素后质粒提出来了吗?有没有检验?
操蛋的XX
2楼2015-08-21 15:35:53
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无忌2013

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2015-08-21 15:35:53
那你质粒扩增加错抗生素后质粒提出来了吗?有没有检验?

提出来了,没检验直接转染,但看不到绿色荧光
工作中
3楼2015-08-21 15:39:11
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for5

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 无忌2013 at 2015-08-21 15:39:11
提出来了,没检验直接转染,但看不到绿色荧光...

最好检验一下是不是你的质粒。
前提当然你抗生素是加错了。不过你如果检验了提出来质粒没问题,那下面的转染就和你之前的扩增没关系了。
转染的时候操作也没问题的话,那就只能是蛋白没表达。
但是你说GFP没表达,还是先检验质粒有没有问题吧,然后在考虑转染是不是有问题。
瞬转不需要抗生素。
操蛋的XX
4楼2015-08-21 15:44:51
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无忌2013

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by for5 at 2015-08-21 15:44:51
最好检验一下是不是你的质粒。
前提当然你抗生素是加错了。不过你如果检验了提出来质粒没问题,那下面的转染就和你之前的扩增没关系了。
转染的时候操作也没问题的话,那就只能是蛋白没表达。
但是你说GFP没表达 ...

说的对,应该检验下质粒,下次我重新做一次
工作中
5楼2015-08-21 16:02:20
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无忌2013

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by for5 at 2015-08-21 15:44:51
最好检验一下是不是你的质粒。
前提当然你抗生素是加错了。不过你如果检验了提出来质粒没问题,那下面的转染就和你之前的扩增没关系了。
转染的时候操作也没问题的话,那就只能是蛋白没表达。
但是你说GFP没表达 ...

谢谢啊
工作中
6楼2015-08-21 16:02:31
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MarchZR

银虫 (小有名气)

瞬转稳转,这种情况有的吧,或者真核细胞表达没有蛋白表达,
7楼2015-10-15 16:56:44
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