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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

[求助] 求助!HRM PCR基因分型问题 已有1人参与

最近在做HRM PCR基因分型,但在PCR扩增的过程中出现了各种问题,有做过HRM PCR的吗,能否交流一下经验?在此不胜感激!
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sxfldn at 2015-08-25 09:19:44
稀释的浓度一样吗?无模板对照有扩增吗?

质粒稀释的浓度都是一样的,样品DNA模板的浓度大致差别也不大都在60-70ng/uL的范围,无模板的对照没有扩增,我觉得应该没有污染。但是做出来的结果不好,有些就做不出分型,我该开始接触HRM PCR,很多都不太懂,谢谢您的帮助。出现这样的结果也找不到原因,很是困惑。
7楼2015-08-25 09:34:37
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ptttmt

银虫 (正式写手)

具体说说都出现了啥情况

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-08-21 15:31:32
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-08-21 15:31:32
具体说说都出现了啥情况

就是质粒做的两个重复,重复样本间的差异很大,还有就是相同的基因位点,不同的样本,扩增曲线差异也很大,有时候扩增的曲线很不好,PCR条件都是相同的,PCR仪也是同一台,刚接触HRM PCR,很多操作过程可能都不是很规范,能不能细讲一下。谢谢了!
3楼2015-08-24 08:33:39
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许彦

木虫 (正式写手)

首先你用的什么pcr仪器,
同一个样本重复差异有很多,但是tm值应该是不会有变化的。

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-08-24 10:01:24
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