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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

[求助] 求助!HRM PCR基因分型问题 已有1人参与

最近在做HRM PCR基因分型,但在PCR扩增的过程中出现了各种问题,有做过HRM PCR的吗,能否交流一下经验?在此不胜感激!
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许彦

木虫 (正式写手)

首先你用的什么pcr仪器,
同一个样本重复差异有很多,但是tm值应该是不会有变化的。

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-08-24 10:01:24
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ptttmt

银虫 (正式写手)

具体说说都出现了啥情况

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-08-21 15:31:32
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-08-21 15:31:32
具体说说都出现了啥情况

就是质粒做的两个重复,重复样本间的差异很大,还有就是相同的基因位点,不同的样本,扩增曲线差异也很大,有时候扩增的曲线很不好,PCR条件都是相同的,PCR仪也是同一台,刚接触HRM PCR,很多操作过程可能都不是很规范,能不能细讲一下。谢谢了!
3楼2015-08-24 08:33:39
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 许彦 at 2015-08-24 10:01:24
首先你用的什么pcr仪器,
同一个样本重复差异有很多,但是tm值应该是不会有变化的。

用的是Rotor-Gene Q PCR仪,因为做的样本量较大,做了野生型,纯合型,杂合型的质粒分别做了两组,同样都是野生型的两个曲线,两个相比,其中一个明显滞后了,两组质粒相比的话,另一组质粒的扩增曲线都滞后于第一组,不清楚跟放置孔的位置有关还是怎么回事。我之前做的比较基因表达量的荧光PCR的时候,每个样品都是做三个重复的,而做HRM PCR的时候,我们公司都不做重复,我觉得不是很好,刚开始做HRM PCR很多都不太懂。结果不是太好也找不到原因,能够得到您的帮助非常的感谢。
5楼2015-08-25 08:45:44
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