24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

喜自然果冻

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 48.8
散金: 15
帖子: 45
在线: 12.8小时
虫号: 4020439
注册: 2015-08-10
性别: GG
专业: 生物化学

[求助] Taqman探针法RT-PCR的实验体系实验步骤哪位大神能够发一下！！已有4人参与

网上找的基本都是燃料法的，探针法的也只是一些原理，

我想要实际实验的体系、步骤的，哪位大牛能发一下

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有213人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

1楼2015-08-14 16:08:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 335.2
散金: 12
红花: 1
帖子: 215
在线: 43.4小时
虫号: 13010065
注册: 2018-11-29
专业: 实验动物学

【答案】应助回帖

基本步骤：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；
2、引物、探针的设计；
3、引物探针的合成；
4、反应体系的配制；
5、反应条件的设定；
6、反应体系和条件的优化；
7、荧光曲线和数据分析；
8、标准品的制备；
Biodai Taqman 探针设计一般设计原则：
 探针位置尽可能地靠近上游引物；
 探针长度通常在25－35bp，Tm值在65－70℃，通常比引物TM高5－10℃，GC含量在40%－70%。
 探针的5’端应避免使用碱基G。
 整条探针中，碱基C的含量要明显高于G的含量。
 为确保引物探针的特异性，最好将设计好的序列在blast中核实一次，如果发现有非特异性互补区，建议重新设计引物探针。