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喜自然果冻

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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在线: 12.8小时
虫号: 4020439
注册: 2015-08-10
性别: GG
专业: 生物化学

[求助] Taqman探针法RT-PCR的实验体系实验步骤哪位大神能够发一下！！已有4人参与

网上找的基本都是燃料法的，探针法的也只是一些原理，

我想要实际实验的体系、步骤的，哪位大牛能发一下

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1楼 2015-08-14 16:08:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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红花: 1
帖子: 215
在线: 43.4小时
虫号: 13010065
注册: 2018-11-29
专业: 实验动物学

【答案】应助回帖

基本步骤：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；
2、引物、探针的设计；
3、引物探针的合成；
4、反应体系的配制；
5、反应条件的设定；
6、反应体系和条件的优化；
7、荧光曲线和数据分析；
8、标准品的制备；
Biodai Taqman 探针设计一般设计原则：
 探针位置尽可能地靠近上游引物；
 探针长度通常在25－35bp，Tm值在65－70℃，通常比引物TM高5－10℃，GC含量在40%－70%。
 探针的5’端应避免使用碱基G。
 整条探针中，碱基C的含量要明显高于G的含量。
 为确保引物探针的特异性，最好将设计好的序列在blast中核实一次，如果发现有非特异性互补区，建议重新设计引物探针。