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喜自然果冻新虫 (初入文坛)
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Taqman探针法RT-PCR的实验体系实验步骤哪位大神能够发一下！！已有4人参与
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网上找的基本都是燃料法的，探针法的也只是一些原理， 我想要实际实验的体系、步骤的，哪位大牛能发一下 |
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2楼2015-08-15 00:41:26
helios_hj
至尊木虫 (著名写手)
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3楼2015-08-15 10:18:00
喜自然果冻
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4楼2015-08-17 08:36:11
5楼2015-08-17 10:13:56
6楼2015-08-18 15:42:55
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7楼2015-08-25 10:34:53
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8楼2015-08-25 10:38:02
9楼2018-09-21 13:57:03
【答案】应助回帖
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基本步骤：1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对； 2、 引物、探针的设计； 3、 引物探针的合成； 4、 反应体系的配制； 5、 反应条件的设定； 6、 反应体系和条件的优化； 7、 荧光曲线和数据分析； 8、 标准品的制备； Biodai Taqman 探针设计 一般设计原则： 探针位置尽可能地靠近上游引物； 探针长度通常在25－35bp，Tm值在65－70℃，通常比引物TM高5－10℃，GC含量在40%－70%。 探针的5’端应避免使用碱基G。 整条探针中，碱基C的含量要明显高于G的含量。 为确保引物探针的特异性，最好将设计好的序列在blast中核实一次，如果发现有非特异性互补区，建议重新设计引物探针。 |
10楼2019-02-19 08:43:22