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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 分光光度计偏差问题
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依梵1988

新虫 (初入文坛)

[求助] 分光光度计偏差问题 已有4人参与

各位大神，求助一个关于分光光度计的问题。实验室有两台分光光度计，测定同一份菌悬液样品的时候，使用580nm，一个测定值为0.381，一个测定值为0.563；但是测定同一份重铬酸钾溶液时，使用475nm，两台仪器的测定值几乎相同，这是什么原因呢？
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1楼 2015-08-14 14:53:50
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依梵1988

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 左岸Mercy at 2015-08-14 15:33:06
如果确定样品是同一样品，且在同样时间和条件下用不同仪器测的话，结果不同，就能肯定是仪器问题。先排查是不是使用不当，没有校零点扣空白，或其他操作不当，再看看是不是灯出了问题，用不同虑光片试，常用波长都检 ...

两台仪器是放在一起的，同样的空白和待测样，这台仪器测完，用另一台仪器测，样品是一样的，操作也是相同操作，只是波长的设定不同，每次换波长之后也都有预热。如果是灯的问题，但是重铬酸钾溶液的测定值是相同的，现在我也很犹豫，和厂家联系，厂家也是说不清楚。
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6楼2015-08-15 15:06:22
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依梵1988

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 左岸Mercy at 2015-08-14 15:37:59
还有是不是你的菌液不均匀，局部浓度不一样，而重铬酸钾是很均匀分散的溶液

菌液是均匀的，测之前都有震荡，而且是这边测完接着就那边测，应该不是均匀性不好的原因。
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7楼2015-08-15 15:07:31
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依梵1988

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by gaochengguo at 2015-08-14 16:43:11
用全波长扫描，确定菌悬液的最大吸收的波长。

菌悬液的吸收波长我们一直都是使用580nm，很多的文献也都是使用这一波长。
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8楼2015-08-15 15:08:14
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依梵1988

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by 3306549 at 2015-08-14 22:01:54
震荡混匀
每一个点做之前都震荡，不要震荡一次之后取好几个点，这样你放置的时候就会沉淀

恩恩，是的，震荡这个问题，我们一直都很注意，每次测之前都会震荡摇匀的。所以，现在也不知道问题出在哪里，很是纠结啊……
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9楼2015-08-15 15:09:13
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依梵1988

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by 3306549 at 2015-08-16 10:24:25
= =||
那是不是比色皿的问题？好比一个玻璃一个石英？最好也别用狭缝
分光光度计的差异也有可能，不过应该不是这个
温度和培养时间？或者你取样的时候有没有摇匀？...

比色皿是一样的，两个，一个空白一个样品，在1号仪器上测完，然后用2号仪器测，然后再改变波长，换样品，再在1号仪器上测完，然后用2号仪器测。菌悬液的测定值相差很大，重铬酸钾溶液的测定值几乎一样。愁人啊……
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11楼2015-08-17 07:52:36
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依梵1988

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by 3306549 at 2015-08-16 10:24:25
= =||
那是不是比色皿的问题？好比一个玻璃一个石英？最好也别用狭缝
分光光度计的差异也有可能，不过应该不是这个
温度和培养时间？或者你取样的时候有没有摇匀？...

分光光度计用狭缝是什么意思？我们一般都开机，设定波长，预热就可以用了，没有设定过狭缝这个问题，求指教……
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12楼2015-08-17 07:53:37
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依梵1988

新虫 (初入文坛)
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13楼: Originally posted by wstt1991 at 2015-08-17 08:07:05
我觉得也是最佳吸收波长没有找对

重铬酸钾溶液，我们买的是标准溶液，按照说明书上的波长要求使用的，菌悬液就是大肠杆菌的菌悬液，使用的波长也是在大家通用的580到600nm的范围内的，不知道是怎么回事呢？
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14楼2015-08-17 09:03:02
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