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依梵1988

新虫 (初入文坛)

[求助] 分光光度计偏差问题 已有4人参与

各位大神,求助一个关于分光光度计的问题。实验室有两台分光光度计,测定同一份菌悬液样品的时候,使用580nm,一个测定值为0.381,一个测定值为0.563;但是测定同一份重铬酸钾溶液时,使用475nm,两台仪器的测定值几乎相同,这是什么原因呢?
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左岸Mercy

木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
如果确定样品是同一样品,且在同样时间和条件下用不同仪器测的话,结果不同,就能肯定是仪器问题。先排查是不是使用不当,没有校零点扣空白,或其他操作不当,再看看是不是灯出了问题,用不同虑光片试,常用波长都检一遍,有问题找厂家修

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破茧成蝶时,沧海任我飞
2楼2015-08-14 15:33:06
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左岸Mercy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有是不是你的菌液不均匀,局部浓度不一样,而重铬酸钾是很均匀分散的溶液

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破茧成蝶时,沧海任我飞
3楼2015-08-14 15:37:59
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gaochengguo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用全波长扫描,确定菌悬液的最大吸收的波长。
如今的痛苦终会成为以后的财富
4楼2015-08-14 16:43:11
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3306549

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
震荡混匀
每一个点做之前都震荡,不要震荡一次之后取好几个点,这样你放置的时候就会沉淀
5楼2015-08-14 22:01:54
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依梵1988

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 左岸Mercy at 2015-08-14 15:33:06
如果确定样品是同一样品,且在同样时间和条件下用不同仪器测的话,结果不同,就能肯定是仪器问题。先排查是不是使用不当,没有校零点扣空白,或其他操作不当,再看看是不是灯出了问题,用不同虑光片试,常用波长都检 ...

两台仪器是放在一起的,同样的空白和待测样,这台仪器测完,用另一台仪器测,样品是一样的,操作也是相同操作,只是波长的设定不同,每次换波长之后也都有预热。如果是灯的问题,但是重铬酸钾溶液的测定值是相同的,现在我也很犹豫,和厂家联系,厂家也是说不清楚。
6楼2015-08-15 15:06:22
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依梵1988

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 左岸Mercy at 2015-08-14 15:37:59
还有是不是你的菌液不均匀,局部浓度不一样,而重铬酸钾是很均匀分散的溶液

菌液是均匀的,测之前都有震荡,而且是这边测完接着就那边测,应该不是均匀性不好的原因。
7楼2015-08-15 15:07:31
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依梵1988

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gaochengguo at 2015-08-14 16:43:11
用全波长扫描,确定菌悬液的最大吸收的波长。

菌悬液的吸收波长我们一直都是使用580nm,很多的文献也都是使用这一波长。
8楼2015-08-15 15:08:14
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依梵1988

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 3306549 at 2015-08-14 22:01:54
震荡混匀
每一个点做之前都震荡,不要震荡一次之后取好几个点,这样你放置的时候就会沉淀

恩恩,是的,震荡这个问题,我们一直都很注意,每次测之前都会震荡摇匀的。所以,现在也不知道问题出在哪里,很是纠结啊……
9楼2015-08-15 15:09:13
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3306549

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 依梵1988 at 2015-08-15 15:09:13
恩恩,是的,震荡这个问题,我们一直都很注意,每次测之前都会震荡摇匀的。所以,现在也不知道问题出在哪里,很是纠结啊……...

= =||
那是不是比色皿的问题?好比一个玻璃一个石英?最好也别用狭缝
分光光度计的差异也有可能,不过应该不是这个
温度和培养时间?或者你取样的时候有没有摇匀?
10楼2015-08-16 10:24:25
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