| 查看: 2198 | 回复: 8 | ||
[求助]
蛋白活性实验ELISA检测结果无法解释，求助。 已有2人参与
|
|
实验目的：检测某蛋白可以刺激肝细胞内cAMP量上升。 实验过程： 1我们没有正常的肝细胞，于是就拿了HepG2细胞代替肝细胞（我们参考的文献也是用的HepG2）。 2实验具体流程是：培养HepG2，消化 用加血清的培养基稀释到1.5*10^5每毫升； 96孔板中每孔加200ul稀释细胞液，37度培养5h； 吸掉培养液，换成200ul不含血清的培养基，培养24h； （这个时候观察，基本96孔底部已经被铺满了） 去掉培养基，换成170ul培养基，加10ulIBMX（抑制水解cAMP的酶，从而使cAMP在细胞内累积），加入20ul蛋白样品，另设置溶解蛋白buffer对照组（buffer成分为磷酸盐缓冲液和低浓度氯化钠）。 培养1h，去掉培养基，换成0.1mol盐酸裂解细胞30min，收取上清。 （至此，样品就做好了，接下来的elisa操作全部按照试剂盒要求做的，唯一不同的是，我们怕加盐酸导致pH太低，在样品中加入了磷酸氢二钠中和pH到7左右） 3实验结果：做了好几次，每次buffer对照组的吸光度都比浓度最高的实验组的吸光度高，而且梯度的实验组很难看出趋势。我们的想法是，即使蛋白没有效果，那测的cAMP的量至少应该和仅有buffer的效果一样啊，不会有明显差异的才对。 因为我们在这方面不是专业的，具体方法也是网上找的，请问到底哪一步出现了问题才会有这种结果？（如果实验细节不详细，可以问，我再具体说哈） [ Last edited by jusperchan on 2015-8-14 at 11:20 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？
已经有9人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有6人回复
-
应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键
已经有20人回复
-
2026国自然放榜时间
已经有9人回复
-
这样的filecode谁见过
已经有22人回复
-
据悉今年马上要出结果了
已经有6人回复
-
面上项目filecode邪修
已经有7人回复
-
关于代码变化问题，想知道的进来
已经有22人回复
-
filecode与中标关系的预测
已经有5人回复
-
fileCode有新解读？
已经有18人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2015-08-14 15:04:40
3楼2015-08-14 15:41:27
4楼2015-08-18 13:52:54
5楼2015-08-18 13:55:33
6楼2015-08-18 14:26:58
7楼2015-08-18 17:03:54
8楼2015-10-18 16:07:05
9楼2017-03-16 16:08:29
20