24小时热门版块排行榜    

查看: 774  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

顾钻研

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,怎样才能做好细菌DGGE图 已有2人参与

本人正在做细菌DGGE,但是出来的图条带模糊一片,而且跑不开,细菌PCR扩增条带都是很亮的,我做的胶是20%-40%,90v电泳12h,染色20min,求助为什么跑出来的图如下面这样呢?请各位大神指点指点。。。。。。

求助,怎样才能做好细菌DGGE图
1.PNG


求助,怎样才能做好细菌DGGE图-1
2.PNG
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

顾钻研

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shanliwademen at 2015-08-13 01:29:16
根据你的描述和从图上看,主要存在两个问题,一是胶不合适,主要是不同浓度变性剂的胶没有混成梯度,而是电泳条件不合适。所以建议如下,1,如果变性剂是用的尿素,请用30%和60%的胶,而且要事先用红蓝胶模拟配胶确保 ...

我之前做过40%-60%的胶。110v电压10小时,出现的带也是模糊一片,我自己也认为是我做胶的问题,你说的红蓝胶模拟配胶是怎样做的,我们实验室没听说有人这样做过,所以我还不知道怎么做?还有我的PCR扩增,有哪里不好吗?我看不出来,指教一下?
3楼2015-08-13 14:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

shanliwademen

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
顾钻研: 金币+3 2015-08-13 14:44:36
根据你的描述和从图上看,主要存在两个问题,一是胶不合适,主要是不同浓度变性剂的胶没有混成梯度,而是电泳条件不合适。所以建议如下,1,如果变性剂是用的尿素,请用30%和60%的胶,而且要事先用红蓝胶模拟配胶确保变性梯度均匀,2,请用,105伏电压10小时电泳。同时注意两个小问题,1,保证电泳液恒温,如果电泳4小时后电泳液温度上升太高会出现彗星泳道,2,微量上样器点样是不飘不穿无气泡。当然我以上所说是认为你pcr的DNA是没问题的,但看你的pcr结果我还是不放心,建议下次加对照。上述为鄙人拙见,如有不妥之处请批评指正。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2015-08-13 01:29:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨夜不爱学

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我最近也在做细菌dgge啊,摸索中,我感觉你的pcr条带有拖尾,可能是引物特异性不好,另外DGGE感觉你的胶的梯度太小,35%-65%常见,我用的是35—55%,为保证肉眼可见的确定胶的梯度,可以在高浓度胶中加入dye sloution 。配方的话在仪器的menu中都有。
4楼2015-08-19 10:08:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:27 by oEVWOejN9taj
[找工作] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:39 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
请填处理意见