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顾钻研

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[求助] 求助，怎样才能做好细菌DGGE图已有2人参与

本人正在做细菌DGGE，但是出来的图条带模糊一片，而且跑不开，细菌PCR扩增条带都是很亮的，我做的胶是20%-40%，90v电泳12h,染色20min,求助为什么跑出来的图如下面这样呢？请各位大神指点指点。。。。。。

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1楼 2015-08-12 16:34:42

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shanliwademen

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
顾钻研: 金币+3 2015-08-13 14:44:36

根据你的描述和从图上看，主要存在两个问题，一是胶不合适，主要是不同浓度变性剂的胶没有混成梯度，而是电泳条件不合适。所以建议如下，1,如果变性剂是用的尿素，请用30%和60%的胶，而且要事先用红蓝胶模拟配胶确保变性梯度均匀，2，请用，105伏电压10小时电泳。同时注意两个小问题，1，保证电泳液恒温，如果电泳4小时后电泳液温度上升太高会出现彗星泳道，2,微量上样器点样是不飘不穿无气泡。当然我以上所说是认为你pcr的DNA是没问题的，但看你的pcr结果我还是不放心，建议下次加对照。上述为鄙人拙见，如有不妥之处请批评指正。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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2楼2015-08-13 01:29:16

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顾钻研

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引用回帖:

2楼: Originally posted by shanliwademen at 2015-08-13 01:29:16
根据你的描述和从图上看，主要存在两个问题，一是胶不合适，主要是不同浓度变性剂的胶没有混成梯度，而是电泳条件不合适。所以建议如下，1,如果变性剂是用的尿素，请用30%和60%的胶，而且要事先用红蓝胶模拟配胶确保 ...

我之前做过40%-60%的胶。110v电压10小时，出现的带也是模糊一片，我自己也认为是我做胶的问题，你说的红蓝胶模拟配胶是怎样做的，我们实验室没听说有人这样做过，所以我还不知道怎么做？还有我的PCR扩增，有哪里不好吗？我看不出来，指教一下？

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3楼2015-08-13 14:44:28

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