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求助，怎样才能做好细菌DGGE图 已有2人参与
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本人正在做细菌DGGE，但是出来的图条带模糊一片，而且跑不开，细菌PCR扩增条带都是很亮的，我做的胶是20%-40%，90v电泳12h,染色20min,求助为什么跑出来的图如下面这样呢？请各位大神指点指点。。。。。。 1.PNG  2.PNG |
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shanliwademen
木虫 (正式写手)
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- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
顾钻研: 金币+3 2015-08-13 14:44:36
感谢参与，应助指数 +1
顾钻研: 金币+3 2015-08-13 14:44:36
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根据你的描述和从图上看，主要存在两个问题，一是胶不合适，主要是不同浓度变性剂的胶没有混成梯度，而是电泳条件不合适。所以建议如下，1,如果变性剂是用的尿素，请用30%和60%的胶，而且要事先用红蓝胶模拟配胶确保变性梯度均匀，2，请用，105伏电压10小时电泳。同时注意两个小问题，1，保证电泳液恒温，如果电泳4小时后电泳液温度上升太高会出现彗星泳道，2,微量上样器点样是不飘不穿无气泡。当然我以上所说是认为你pcr的DNA是没问题的，但看你的pcr结果我还是不放心，建议下次加对照。上述为鄙人拙见，如有不妥之处请批评指正。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
2楼2015-08-13 01:29:16
3楼2015-08-13 14:44:28
4楼2015-08-19 10:08:28