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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 煮蛋白样时忘加loading buffer了
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上帝的饮料

新虫 (初入文坛)

[求助] 煮蛋白样时忘加loading buffer了 已有7人参与

脑子抽了，没加loading buffer直接去煮了10min，后来想起来就又加了loading buffer煮了5min，还能用吗？我感觉分析一下loading buffer的作用倒是可以，谁做过
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1楼 2015-08-09 17:23:03
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by xujian568 at 2015-08-10 09:44:18
2*SDS loading buffer
tris-hcl/sds/dtt/BME
缓冲（稳定）／变性／上样辅助

DTT/BME是为了打开二硫键，还有甘油才是辅助上样。煮沸是为了变性和打开二硫键，但没有SDS和还原剂的话只会变性沉淀。
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9楼2015-08-11 05:19:41
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
loading buffer的主要作用有两个，指示剂；携带你的样本沉到孔的底部，但一般buffer里都会加蛋白抑制剂，刚开始煮的那10分钟会不会已经把蛋白给降解了呀？你倒是可以试着做一下，看蛋白量及电泳效果怎么样，说不定有新发现
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医学&统计学
2楼2015-08-09 17:43:29
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上帝的饮料

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-08-09 17:43:29
loading buffer的主要作用有两个，指示剂；携带你的样本沉到孔的底部，但一般buffer里都会加蛋白抑制剂，刚开始煮的那10分钟会不会已经把蛋白给降解了呀？你倒是可以试着做一下，看蛋白量及电泳效果怎么样，说不定有 ...

望大神指点。loading buffer里什么是蛋白抑制剂啊，高温煮沸不会破坏蛋白酶的活性吗？
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3楼2015-08-09 18:11:42
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
上帝的饮料: 金币+2, ★有帮助 2015-08-12 09:19:45
本帖内容被屏蔽
4楼2015-08-09 18:59:24
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查看全部 11 个回答
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