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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 煮蛋白样时忘加loading buffer了
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上帝的饮料

新虫 (初入文坛)

[求助] 煮蛋白样时忘加loading buffer了 已有7人参与

脑子抽了，没加loading buffer直接去煮了10min，后来想起来就又加了loading buffer煮了5min，还能用吗？我感觉分析一下loading buffer的作用倒是可以，谁做过
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1楼 2015-08-09 17:23:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ghqiu09

禁虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
上帝的饮料: 金币+2, ★有帮助 2015-08-12 09:19:45
本帖内容被屏蔽
4楼2015-08-09 18:59:24
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
上帝的饮料: 金币+1, ★有帮助, thanks 2015-08-12 09:19:21
2*SDS loading buffer
tris-hcl/sds/dtt/BME
缓冲（稳定）／变性／上样辅助
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活着就要让人感受到你的存在。
7楼2015-08-10 09:44:18
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普通回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
loading buffer的主要作用有两个，指示剂；携带你的样本沉到孔的底部，但一般buffer里都会加蛋白抑制剂，刚开始煮的那10分钟会不会已经把蛋白给降解了呀？你倒是可以试着做一下，看蛋白量及电泳效果怎么样，说不定有新发现
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医学&统计学
2楼2015-08-09 17:43:29
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上帝的饮料

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-08-09 17:43:29
loading buffer的主要作用有两个，指示剂；携带你的样本沉到孔的底部，但一般buffer里都会加蛋白抑制剂，刚开始煮的那10分钟会不会已经把蛋白给降解了呀？你倒是可以试着做一下，看蛋白量及电泳效果怎么样，说不定有 ...

望大神指点。loading buffer里什么是蛋白抑制剂啊，高温煮沸不会破坏蛋白酶的活性吗？
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3楼2015-08-09 18:11:42
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上帝的饮料

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-09 18:59:24
没碰到过，不过你的样品直接煮过后应该有沉淀吧，那别扔，就按你自己说的做，死马当活马医了呗。我们的loading buffer里从来不加抑制剂

今天晚上试了一下，没啥问题，算是积累了一个经验吧
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5楼2015-08-09 23:54:08
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
上帝的饮料: 金币+1, ★有帮助, 是的 2015-08-12 09:19:58
Loading buffer一方面是只是的作用 另一方面是变性剂，它里面含有的巯基乙醇是很好的蛋白变性剂。高温煮也是为了让蛋白变性。他们的作用是一样的
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6楼2015-08-10 08:38:22
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lcuwxy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
又长见识了······感谢LZ
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8楼2015-08-10 12:34:25
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by xujian568 at 2015-08-10 09:44:18
2*SDS loading buffer
tris-hcl/sds/dtt/BME
缓冲（稳定）／变性／上样辅助

DTT/BME是为了打开二硫键，还有甘油才是辅助上样。煮沸是为了变性和打开二硫键，但没有SDS和还原剂的话只会变性沉淀。
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9楼2015-08-11 05:19:41
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没事的，重新加了煮下就好。反正都是变性电泳，没问题的，早晚都会变性的
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10楼2015-08-11 09:19:58
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