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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 煮蛋白样时忘加loading buffer了
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上帝的饮料

新虫 (初入文坛)

[求助] 煮蛋白样时忘加loading buffer了 已有7人参与

脑子抽了，没加loading buffer直接去煮了10min，后来想起来就又加了loading buffer煮了5min，还能用吗？我感觉分析一下loading buffer的作用倒是可以，谁做过
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1楼 2015-08-09 17:23:03
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
上帝的饮料: 金币+2, ★有帮助 2015-08-12 09:19:45
本帖内容被屏蔽
4楼2015-08-09 18:59:24
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
loading buffer的主要作用有两个，指示剂；携带你的样本沉到孔的底部，但一般buffer里都会加蛋白抑制剂，刚开始煮的那10分钟会不会已经把蛋白给降解了呀？你倒是可以试着做一下，看蛋白量及电泳效果怎么样，说不定有新发现
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医学&统计学
2楼2015-08-09 17:43:29
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上帝的饮料

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-08-09 17:43:29
loading buffer的主要作用有两个，指示剂；携带你的样本沉到孔的底部，但一般buffer里都会加蛋白抑制剂，刚开始煮的那10分钟会不会已经把蛋白给降解了呀？你倒是可以试着做一下，看蛋白量及电泳效果怎么样，说不定有 ...

望大神指点。loading buffer里什么是蛋白抑制剂啊，高温煮沸不会破坏蛋白酶的活性吗？
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3楼2015-08-09 18:11:42
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上帝的饮料

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-09 18:59:24
没碰到过，不过你的样品直接煮过后应该有沉淀吧，那别扔，就按你自己说的做，死马当活马医了呗。我们的loading buffer里从来不加抑制剂

今天晚上试了一下，没啥问题，算是积累了一个经验吧
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5楼2015-08-09 23:54:08
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