| 查看: 1127 | 回复: 3 | ||
夏夜微风木虫 (正式写手)
|
[求助]
融合PCR 已有2人参与
|
|
最近做了融合PCR，做了十多天。 三个片段①522bp，②1274bp，③587bp 引物①-F:cgcgatatcttatgtatgctcttctgacttttcg；①-R:gttatgcggccgctttgattgatttgactgtgttattttg 引物②-F:cgcaaaataacacagtcaaatcaatcaaagcggccgcataacttcgtataatgtatgctatacgaagttatcgttttaagagcttggtgagc; ②-R:tatacgaagttattgtgcggtatttcacaccgc 引物③-F:catatgcggtgtgaaataccgcacaataacttcgtataatgtatgctatacgaagttatccgcgggcgatttaatctctaattattag ③-R:cgcgatatctttcaatcattggagcaatcattttac 50ul反应体系： 5× Buffer（5mM Mg2+ plus） 10ul dNTP Mixture（2.5mM each） 4.5ul DNA polymerase（2.5unit/ul） 0.5ul 模版1 0.5ul 模版2 0.5ul 模版3 0.5ul ddH2O 33.5ul PCR反应条件： Volume：50ul 1. 98℃，10s 2. 98℃，10s 3. 51℃，3min +0.2℃ per cycle +12s per cycle 4. 72℃，2min30s 5. GOTO step2，10× 6. 72℃，10min 7. 4℃，∞ 然后加引物①-F、③-R再PCR PCR反应条件： Volume：20ul 1. 94℃，30s 2. 94℃，30s 3. 53℃，1min 4. 72℃，3min 5. GOTO step2，27× 6. 72℃，10min 7. 12℃，∞ 跑出来的条带在2300左右。但是胶回收在进行PCR验证时，却没有2300bp左右的条带了，这是为什么啊？ ①-F×②-R；②-F×③-R；①-F×③-R三组引物进行PCR，但没有相应条带，这到底是为什么啊？ PCR反应条件： Volume：20ul 1. 94℃，1min 2. 94℃，30s 3. 53℃，1min 4. 72℃，3min 5. GOTO step2，27× 6. 72℃，10min 7. 12℃，∞ |
回复此楼» 猜你喜欢
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有262人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
-
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
liygmail
至尊木虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 14357.4
- 红花: 5
- 帖子: 3410
- 在线: 820.3小时
- 虫号: 280786
- 注册: 2006-09-17
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
2楼2015-08-10 13:20:25
3楼2016-03-10 13:33:23
夏夜微风
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1630.5
- 散金: 409
- 红花: 4
- 沙发: 7
- 帖子: 730
- 在线: 123小时
- 虫号: 2703859
- 注册: 2013-10-07
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2016-03-10 18:28:34