| 查看: 1843 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
毕赤酵母重组转化子pcr鉴定问题 已有3人参与
|
|||
|
各位同仁大侠好： 我最近在做给一个基因的C端加上标签以便于后期蛋白纯化研究其结构，采用的是pcr介导的同源重组。目标区域上下游各取51-54bp的同源序列作为pcr引物一部分，另加载体引物22bp，利用携带标签和筛选标记的质粒做模板进行pcr扩增，pcr产物测序正确，pcr产物纯化后电转化到毕赤酵母X33中，Zeocin筛选，30度培养3天后有转化子出现，摇菌、抽提酵母基因组DNA，以此为模板进行pcr，抗性基因有产物，但是跨插入区域的引物pcr结果显示此区域没有插入（即pcr产物是正常非插入大小），再选一个插入片段内的引物和目标区域的组合得不到pcr产物。从抗性筛选标记来说目的片段是整合到酵母基因组中的，但是整合位置似乎不在目标区域（因为pcr检测不到有插入），那能整合到基因组的什么位置呢？不解？？？求解，感谢！我只有一个金币全给啊 |
回复此楼» 猜你喜欢
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有52人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
3楼2017-06-17 10:55:03
2楼2017-02-23 15:41:51
asdqwer1234
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 35.9
- 散金: 125
- 帖子: 182
- 在线: 105.1小时
- 虫号: 5300754
- 注册: 2016-11-30
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2018-11-14 20:53:58
