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[求助]
PCR是成功的，但是漏P约30左右bp,这是为什么 已有2人参与
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| 是这样的，我是要构建一个质粒，我设计的引物5‘端有酶切位点（已经加了保护碱基），我使用的是Tag酶进行PCR，经过PCR，胶回收，双酶切，胶回收，T4连接（与载体pcDNA3.1(+)连接），转化，挑单克隆，酶切鉴定，测序，最后发现我的目的基因的确与我想要的载体连接上了，但是发现缺失部分序列，求大神找出可能的原因~ |
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