应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR是成功的，但是漏P约30左右bp,这是为什么
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
41/1返回列表
查看: 784  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Ratiy

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR是成功的，但是漏P约30左右bp,这是为什么 已有2人参与

是这样的，我是要构建一个质粒，我设计的引物5‘端有酶切位点（已经加了保护碱基），我使用的是Tag酶进行PCR，经过PCR，胶回收，双酶切，胶回收，T4连接（与载体pcDNA3.1(+)连接），转化，挑单克隆，酶切鉴定，测序，最后发现我的目的基因的确与我想要的载体连接上了，但是发现缺失部分序列，求大神找出可能的原因~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-08-06 22:56:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ppppppppp

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Ratiy: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-08-09 13:55:15
很可能是酶切时候产生新号活性，把pcr产物错切了一段。你可以看看少了的片段的末尾，是否和限制酶的识别位点比较相似。如果是的话，建议减少酶切时间和酶的用量，加大反应体系。

还有就是pcr产物里就有那个酶切位点。
赞一下 回复此楼
初来乍到，请多指教
2楼2015-08-07 00:54:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上说的有点道理，这么多资料，找找看吧
http://www.detaibio.com/material-downloads.html
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-08-07 09:35:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ratiy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ppppppppp at 2015-08-07 00:54:07
很可能是酶切时候产生新号活性，把pcr产物错切了一段。你可以看看少了的片段的末尾，是否和限制酶的识别位点比较相似。如果是的话，建议减少酶切时间和酶的用量，加大反应体系。

还有就是pcr产物里就有那个酶切位 ...

那么我只是酶切了3个小时多，不是要才不多16个小时才会出现星活性吗？
赞一下 回复此楼
4楼2015-08-09 14:04:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Ratiy 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0817化学工程与技术求调剂，一志愿中海洋319 +9 lv945 2026-04-04 9/450 2026-04-05 05:19 by houyaoxu
[考研] 085600，321分求调剂 +9 大馋小子 2026-04-04 10/500 2026-04-04 23:42 by lqwchd
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +4 zyx上岸！ 2026-04-04 4/200 2026-04-04 23:28 by wxiongid
[考研] 材料专硕306英一数二 +8 z1z2z3879 2026-03-31 8/400 2026-04-04 22:08 by hemengdong
[考研] 0835学硕299求调剂 08大类可接受 +5 useryy 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:07 by 蓝云思雨
[考研] 。 +5 雾与海 2026-04-02 6/300 2026-04-04 19:53 by 蓝云思雨
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 一志愿中国石油大学化学工程323分求调剂 +4 化工专硕323分 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:12 by dongzh2009
[考研] 303求调剂 +9 DLkz1314. 2026-03-30 9/450 2026-04-03 18:34 by ls刘帅
[考研] 材料与化工调剂一志愿大连海事085600，349 +11 吃的不少 2026-03-30 11/550 2026-04-03 18:05 by Jimmyandyou
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:06 by arrow8852
[考研] 一志愿厦门大学化学工程（专硕）-数二英二406分-求调剂 +5 厦大化工 2026-04-01 5/250 2026-04-02 10:03 by jp9609
[考研] 372求调剂 +3 jj涌77 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:57 by olim
[考研] 一志愿西安交大材料学硕（英一数二）347，求调剂到高分子/材料相关专业 +7 zju51 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:35 by CFQZAFU
[考研] 材料专业调剂 +5 啦啦啦哭 2026-03-31 6/300 2026-04-01 16:48 by JourneyLucky
[考研] 339求调剂 +5 zjjkt 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:18 by JourneyLucky
[考研] 254材料与化工求调剂 +3 翰冬林楠 2026-03-30 4/200 2026-03-31 17:53 by yishunmin
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
[考研] 调剂 +4 GK72 2026-03-30 4/200 2026-03-30 20:32 by dick_runner
[考研] 279求调剂 +12 j的立方 2026-03-29 12/600 2026-03-30 20:30 by dick_runner
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭