应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SacI和HindIII离的这么近可以切开吗？
131/2返回列表12下一页
查看: 910  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

biogefart

木虫 (著名写手)

[交流] SacI和HindIII离的这么近可以切开吗？

中间只有7个碱基。
回复此楼

» 猜你喜欢
闹太套
1楼 2008-08-14 16:37:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):thx
4楼从热动力学分析很有道理
另补充几点
从酶本身的考虑：SacI和HindIII均属II型限切酶，酶识别反对称序列并结合于其上
进行切割，所以两个酶是否可以同时切割两个较接近的位点要看酶本身是否可结合
于这段序列，我们可以分析这两个酶的保护碱基数
HindIII：CCCAAGCTTGGG  酶切20h  切割率>75%
SacI   ：CGAGCTCG          酶切20h  切割率>10%
从楼主所给序列初步判断双切从距离上来说是没有问题的

从缓冲体系考虑：
Sac I 为低盐缓冲体系，当盐浓度高于10 mM时，Sac I 的活性被抑制。
HindIII为中盐缓冲体系，低离子强度条件可能会导致星活性。

以NEB酶为例
可使用 NEBuffer 1 + BSA先进行切割1-2h（在此条件下酶切效率100%），
再补HindIII（在此条件下酶切效率50%）进行切割
楼主可根据自己需要确定酶用量
赞一下(11人) 回复此楼
10楼2008-08-14 20:21:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
没有问题的，双切不行的话，就先sac I切再hind III切吧
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-08-14 17:25:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董文娟

金虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx
请教楼上 如果双切不行，可能是什么原因造成的？
如果分两步切  在进行第二步切之前是否需进行DNA提取？？？
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-08-14 17:59:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):楼主还有问题，你再看看。
热动力学原理，其实并不是酶就死死地结合在DNA的酶切位点上面的
一个切完走人另一个接着切
但也有同时binding到一个地方的情况出现，这时候如果离得比较近
那么互相直接可能会有位阻、电荷等的影响
分两步切的话，不需要再次进行DNA提取了
如果怕有星号活性的出现的话，切完一个，热灭活一个，然后温度复原，加第二个酶再切
当然前提是，两个酶所用的buffer是相同的，或者在这个buffer中，活性都能够得到保证
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-08-14 18:23:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董文娟

金虫 (小有名气)
谢谢 再请教，分步切割的时间与双切一样么？
赞一下 回复此楼
5楼2008-08-14 18:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
分步切的话，就按照各个酶推荐的酶切条件以及酶切时间来做
就相当于两个单酶切的先后叠加
赞一下(10人) 回复此楼
6楼2008-08-14 18:37:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

木虫 (著名写手)

很专业 致敬！！

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2008-8-14 18:37:
分步切的话，就按照各个酶推荐的酶切条件以及酶切时间来做
就相当于两个单酶切的先后叠加

7楼2008-08-14 18:41:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
都不好意思了~~~~
赞一下 回复此楼
8楼2008-08-14 19:29:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mark32280667806

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
可以切开
如果是双切了做载体的话，需要先切一下，然后回收，在切一下。（可以先用SCI1先切，然后用HIND3切）
赞一下(10人) 回复此楼
9楼2008-08-14 19:34:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 biogefart 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 12/600 2026-08-21 19:46 by kulium
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 14/700 2026-08-21 16:51 by applepetty
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭