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SacI和HindIII离的这么近可以切开吗？
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| 中间只有7个碱基。 |
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reasonspare(金币+3,VIP+0):thx
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4楼从热动力学分析很有道理 另补充几点 从酶本身的考虑：SacI和HindIII均属II型限切酶，酶识别反对称序列并结合于其上 进行切割，所以两个酶是否可以同时切割两个较接近的位点要看酶本身是否可结合 于这段序列，我们可以分析这两个酶的保护碱基数 HindIII：CCCAAGCTTGGG 酶切20h 切割率>75% SacI ：CGAGCTCG 酶切20h 切割率>10% 从楼主所给序列初步判断双切从距离上来说是没有问题的 从缓冲体系考虑： Sac I 为低盐缓冲体系，当盐浓度高于10 mM时，Sac I 的活性被抑制。 HindIII为中盐缓冲体系，低离子强度条件可能会导致星活性。 以NEB酶为例 可使用 NEBuffer 1 + BSA先进行切割1-2h（在此条件下酶切效率100%）， 再补HindIII（在此条件下酶切效率50%）进行切割 楼主可根据自己需要确定酶用量 |
10楼2008-08-14 20:21:39
2楼2008-08-14 17:25:03
3楼2008-08-14 17:59:26
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
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4楼2008-08-14 18:23:10