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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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biogefart

木虫 (著名写手)

[交流] SacI和HindIII离的这么近可以切开吗?

中间只有7个碱基。
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闹太套
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董文娟

金虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):thx
请教楼上 如果双切不行,可能是什么原因造成的?
如果分两步切  在进行第二步切之前是否需进行DNA提取???
3楼2008-08-14 17:59:26
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查看全部 13 个回答

jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
没有问题的,双切不行的话,就先sac I切再hind III切吧
2楼2008-08-14 17:25:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):楼主还有问题,你再看看。
热动力学原理,其实并不是酶就死死地结合在DNA的酶切位点上面的
一个切完走人另一个接着切
但也有同时binding到一个地方的情况出现,这时候如果离得比较近
那么互相直接可能会有位阻、电荷等的影响
分两步切的话,不需要再次进行DNA提取了
如果怕有星号活性的出现的话,切完一个,热灭活一个,然后温度复原,加第二个酶再切
当然前提是,两个酶所用的buffer是相同的,或者在这个buffer中,活性都能够得到保证
4楼2008-08-14 18:23:10
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董文娟

金虫 (小有名气)

谢谢 再请教,分步切割的时间与双切一样么?
5楼2008-08-14 18:35:48
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