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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SacI和HindIII离的这么近可以切开吗？
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biogefart

木虫 (著名写手)

[交流] SacI和HindIII离的这么近可以切开吗？

中间只有7个碱基。
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闹太套
1楼 2008-08-14 16:37:04
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biogefart

木虫 (著名写手)

很专业 致敬！！

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2008-8-14 18:37:
分步切的话，就按照各个酶推荐的酶切条件以及酶切时间来做
就相当于两个单酶切的先后叠加

7楼2008-08-14 18:41:52
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
没有问题的，双切不行的话，就先sac I切再hind III切吧
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-08-14 17:25:03
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董文娟

金虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx
请教楼上 如果双切不行，可能是什么原因造成的？
如果分两步切  在进行第二步切之前是否需进行DNA提取？？？
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-08-14 17:59:26
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):楼主还有问题，你再看看。
热动力学原理，其实并不是酶就死死地结合在DNA的酶切位点上面的
一个切完走人另一个接着切
但也有同时binding到一个地方的情况出现，这时候如果离得比较近
那么互相直接可能会有位阻、电荷等的影响
分两步切的话，不需要再次进行DNA提取了
如果怕有星号活性的出现的话，切完一个，热灭活一个，然后温度复原，加第二个酶再切
当然前提是，两个酶所用的buffer是相同的，或者在这个buffer中，活性都能够得到保证
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-08-14 18:23:10
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