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关于TA克隆的连接,T载体及大肠杆菌JM109的限制修饰系统 已有1人参与
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1.平时我们设计的引物5’端是非磷酸化的,所以PCR产物在与T载体连接时相应PCR产物5‘端是没有连接的,这个地方的缺口要怎么修复?是依靠宿主的修复系统? 2.咱们从公司购买的T载体是线性的,未去磷酸化,这样的话是不是本身就有自连的可能呢? 3.基因工程中作为制作感受态的大肠杆菌细胞是否是限制-修饰系统缺陷菌?缺陷程度是什么样呢? 4.和第3题差不多同类问题,用大肠杆菌JM109克隆质粒,从中提取的质粒是否部分序列被甲基化? 5.利用质粒作为模板PCR反应产生新的序列,磷酸化自连接后用Dpn1酶切处理,说是除去原来的质粒序列,是这样的吗? 注:可能3,4,5为同一类问题。 |
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3楼2015-08-05 09:57:51
zhaodahe
木虫 (正式写手)
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2楼2015-08-04 19:00:54














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