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关于TA克隆的连接，T载体及大肠杆菌JM109的限制修饰系统 已有1人参与
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1.平时我们设计的引物5’端是非磷酸化的，所以PCR产物在与T载体连接时相应PCR产物5‘端是没有连接的，这个地方的缺口要怎么修复？是依靠宿主的修复系统？ 2.咱们从公司购买的T载体是线性的，未去磷酸化，这样的话是不是本身就有自连的可能呢？ 3.基因工程中作为制作感受态的大肠杆菌细胞是否是限制-修饰系统缺陷菌？缺陷程度是什么样呢？ 4.和第3题差不多同类问题，用大肠杆菌JM109克隆质粒，从中提取的质粒是否部分序列被甲基化？ 5.利用质粒作为模板PCR反应产生新的序列，磷酸化自连接后用Dpn1酶切处理，说是除去原来的质粒序列，是这样的吗？ 注：可能3,4,5为同一类问题。 |
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