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rattiwu

新虫 (初入文坛)

[求助] 胶乳不稳定,抗体发生脱落,SOS求助! 已有3人参与

偶联好的胶乳保存在37℃和室温都不稳定,检测发现是抗体发生了脱落,应该是保存Buffer不合适。我现有的保存Buffer: PBS,海藻糖 5%,PEG 6K 1%,Gly 1%,BSA 0.1%,NaCl 50mM,NaN3 0.1%,pH 6.0。
在此,请教一下胶乳领域的大神:(1)抗体发生脱落是不是和偶联效果也有关系?比如说抗体是通过物理吸附到微球上。
(2)现有的这个配方是不是有需要改进的地方?配制保存液时应该注意哪些问题?
稳定性的问题始终解决不了,搞得整个人都不好了。希望大神们能不吝赐教,多谢!
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rattiwu

新虫 (初入文坛)

高手哪?出来冒个泡撒,天虽热,但小木虫不能丢啊~
2楼2015-08-03 18:11:35
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一盏离愁.xx

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

保存的buffer肯定有问题,还要看你做那一块儿的,配方和ph都有问题

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-08-11 18:12:50
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rattiwu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 一盏离愁.xx at 2015-08-11 18:12:50
保存的buffer肯定有问题,还要看你做那一块儿的,配方和ph都有问题

你好,我做的免疫比浊试剂,因为是刚开始做,所以有点无从下手。配方和pH应该有什么改进哪?能不能赐教一下?多谢!
4楼2015-08-12 14:12:15
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youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

想请教一下:您是如何检测确定是抗体掉下来了?您提到的不稳定是指什么?检测结果掉值吗?还是试剂沉淀?抗体和微球的结合有2种方式:共价偶联和被动吸附。对于被动吸附,抗体和粒子结合,是一个动态的过程,即“吸附——解吸附”,一旦体系中有其它蛋白,比如BSA,其某个区域疏水面积大于抗体和粒子结合区域的疏水面积,一旦抗体解吸附,杂蛋白就有可能竞争结合上去,赖在上面不走了,于是抗体就“掉下来”。个人感觉你的buffer不是主要原因。从上面的原理入手去解决试试。
可能说得不对,您参考一下。
欢迎交流,huxuhua2008@163.com

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2015-08-13 08:50:03
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rattiwu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by youjihuaxue2000 at 2015-08-13 08:50:03
想请教一下:您是如何检测确定是抗体掉下来了?您提到的不稳定是指什么?检测结果掉值吗?还是试剂沉淀?抗体和微球的结合有2种方式:共价偶联和被动吸附。对于被动吸附,抗体和粒子结合,是一个动态的过程,即“吸 ...

将胶乳离心后取上清,跑PAGE电泳,发现胶乳在37℃存放的时间越长,上清中的抗体浓度越高,抗体条带的颜色深浅变化很明显(胶乳体积和加样量全部一致)。网上说影响胶乳稳定性的因素很多,但有不好逐一排除,事情确实有点棘手。
6楼2015-08-13 16:18:42
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youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by rattiwu at 2015-08-13 16:18:42
将胶乳离心后取上清,跑PAGE电泳,发现胶乳在37℃存放的时间越长,上清中的抗体浓度越高,抗体条带的颜色深浅变化很明显(胶乳体积和加样量全部一致)。网上说影响胶乳稳定性的因素很多,但有不好逐一排除,事情确 ...

这个确实是检测是否偶联上去的方法。但生化不建议做得这么复杂。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2015-08-13 22:07:40
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songsong2

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

PH应该是考虑方向,你PH可能太低了
8楼2021-05-06 10:29:11
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