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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 胶乳不稳定，抗体发生脱落，SOS求助！
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rattiwu

新虫 (初入文坛)

[求助] 胶乳不稳定，抗体发生脱落，SOS求助！ 已有3人参与

偶联好的胶乳保存在37℃和室温都不稳定，检测发现是抗体发生了脱落，应该是保存Buffer不合适。我现有的保存Buffer: PBS，海藻糖 5%，PEG 6K 1%，Gly 1%，BSA 0.1%，NaCl 50mM，NaN3 0.1%，pH 6.0。
在此，请教一下胶乳领域的大神：（1）抗体发生脱落是不是和偶联效果也有关系？比如说抗体是通过物理吸附到微球上。
（2）现有的这个配方是不是有需要改进的地方？配制保存液时应该注意哪些问题？
稳定性的问题始终解决不了，搞得整个人都不好了。希望大神们能不吝赐教，多谢！
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1楼 2015-08-02 16:25:18
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rattiwu

新虫 (初入文坛)
高手哪？出来冒个泡撒，天虽热，但小木虫不能丢啊~
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2楼2015-08-03 18:11:35
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一盏离愁.xx

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

保存的buffer肯定有问题，还要看你做那一块儿的，配方和ph都有问题

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-08-11 18:12:50
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rattiwu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 一盏离愁.xx at 2015-08-11 18:12:50
保存的buffer肯定有问题，还要看你做那一块儿的，配方和ph都有问题

你好，我做的免疫比浊试剂，因为是刚开始做，所以有点无从下手。配方和pH应该有什么改进哪？能不能赐教一下？多谢！
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4楼2015-08-12 14:12:15
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youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

想请教一下：您是如何检测确定是抗体掉下来了？您提到的不稳定是指什么？检测结果掉值吗？还是试剂沉淀？抗体和微球的结合有2种方式：共价偶联和被动吸附。对于被动吸附，抗体和粒子结合，是一个动态的过程，即“吸附——解吸附”，一旦体系中有其它蛋白，比如BSA，其某个区域疏水面积大于抗体和粒子结合区域的疏水面积，一旦抗体解吸附，杂蛋白就有可能竞争结合上去，赖在上面不走了，于是抗体就“掉下来”。个人感觉你的buffer不是主要原因。从上面的原理入手去解决试试。
可能说得不对，您参考一下。
欢迎交流，huxuhua2008@163.com

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-08-13 08:50:03
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rattiwu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by youjihuaxue2000 at 2015-08-13 08:50:03
想请教一下：您是如何检测确定是抗体掉下来了？您提到的不稳定是指什么？检测结果掉值吗？还是试剂沉淀？抗体和微球的结合有2种方式：共价偶联和被动吸附。对于被动吸附，抗体和粒子结合，是一个动态的过程，即“吸 ...

将胶乳离心后取上清，跑PAGE电泳，发现胶乳在37℃存放的时间越长，上清中的抗体浓度越高，抗体条带的颜色深浅变化很明显（胶乳体积和加样量全部一致）。网上说影响胶乳稳定性的因素很多，但有不好逐一排除，事情确实有点棘手。
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6楼2015-08-13 16:18:42
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youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by rattiwu at 2015-08-13 16:18:42
将胶乳离心后取上清，跑PAGE电泳，发现胶乳在37℃存放的时间越长，上清中的抗体浓度越高，抗体条带的颜色深浅变化很明显（胶乳体积和加样量全部一致）。网上说影响胶乳稳定性的因素很多，但有不好逐一排除，事情确 ...

这个确实是检测是否偶联上去的方法。但生化不建议做得这么复杂。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2015-08-13 22:07:40
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songsong2

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

PH应该是考虑方向，你PH可能太低了
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8楼2021-05-06 10:29:11
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