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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 启动子和编码序列中间多了十几个碱基序列，影响蛋白的表达吗
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zeroon

木虫 (正式写手)

[求助] 启动子和编码序列中间多了十几个碱基序列，影响蛋白的表达吗 已有4人参与

情况是这样的，我在真菌里面表达一个蛋白，在构建载体的时候，启动子和编码区中间多了十几个碱基序列。现在已经转入真菌了，但不知道蛋白表达了没有。先检测了mRNA，发现是有的。但是现在蛋白到底有没呢？
启动子和编码区中间插入的十几个碱基，会影响蛋白的表达吗？
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1楼 2015-07-31 23:10:32
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-04 22:47:10
启动子序列从最近的ATG开始识别，如果你的那段十几bp有ATG，会有影响。如果没有就没有关系。
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。
4楼2015-08-01 11:12:01
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zeroon

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by ppppppppp at 2015-08-11 21:39:22
我觉得还是有影响的，毕竟核糖体结合到rbs后还得移动到起始密码子上才能翻译，中间的几个碱基的万一形成什么发夹，可能就把核糖体的移动阻碍了。

天哪。。。那启动子该如何预测呢，我们实验室拿的的启动子，实际上就是一个基因的上游序列，我始终怀疑这个启动子的性能
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16楼2015-08-12 11:22:40
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普通回帖

zeroon

木虫 (正式写手)
现在能应助的大神越来越少了
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2楼2015-08-01 10:55:39
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zeroon

木虫 (正式写手)
手工置顶
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3楼2015-08-01 11:08:38
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zeroon

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2015-08-01 11:12:01
启动子序列从最近的ATG开始识别，如果你的那段十几bp有ATG，会有影响。如果没有就没有关系。

我想重新构建表达载体，如果在启动子到编码序列间加几个酶切位点，并且没有ATG这样的。是不是就没有问题了？
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5楼2015-08-01 13:10:42
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zeroon: 金币+1, ★有帮助, 没有帮助 2015-08-01 22:42:37
虽然不懂，但还是想问问，你那十几个bp是3的整数倍么？抗体检测一下你要的蛋白不就行啦
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6楼2015-08-01 14:18:17
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zeroon: 金币+1, ★有帮助, RBS是什么？ 2015-08-01 22:43:03
有RBS么？有的话，一般没有问题。
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活着就要让人感受到你的存在。
7楼2015-08-01 15:04:33
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zeroon at 2015-08-01 13:10:42
我想重新构建表达载体，如果在启动子到编码序列间加几个酶切位点，并且没有ATG这样的。是不是就没有问题了？...

你说的启动子是载体上自带的还是你要把启动子和编码序列一起克隆连接到你的表达载体上？如果是后者，没关系，如果是前者，你就要注意可能会它本身就会从某个区段表达，你注意看下图谱。
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。
8楼2015-08-02 09:37:00
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zeroon

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2015-08-02 09:37:00
你说的启动子是载体上自带的还是你要把启动子和编码序列一起克隆连接到你的表达载体上？如果是后者，没关系，如果是前者，你就要注意可能会它本身就会从某个区段表达，你注意看下图谱。...

我用的启动子是个未知的家伙，就是已知的一个基因的左臂，拿来直接作为启动子用了。现在我想用这段序列作为另一个蛋白基因的启动子，所以要把这两段连接起来，想用融合PCR连接，但是觉得不保险，还是想用酶切位点连接。所以就有了开始的问题。
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9楼2015-08-03 20:15:23
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lyf1850

至尊木虫 (文坛精英)
还得实验证实，理论上影响不大，但是有时会有一些影响！
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坚持不懈，持之以恒！
10楼2015-08-03 20:52:55
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