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13steve

银虫 (初入文坛)

[求助] 求指点新手提RNA技术 已有3人参与

新手上路,刚提了一次虫子的rna,听说胶图有三条带才能用,我的只有两条,另外测的浓度在1000左右吧,260/230比较低,在1、5左右,260/280大约能在1·8到2·0之间吧,求教改进方法。

求指点新手提RNA技术
dell 2015-07-26 23hr 01min.jpg
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-28 22:57:29
虫子的RNA,有可能只有一条带,你的这个就是量低了点,活虫用液氮速冻,
然后-80保存,干冰运输,或者活体运输,用液氮研磨,1分钟研磨完成。
然后就速战速决,电泳的话,换新的电泳缓冲液就行,时间电泳无特殊要求。
80-180V电压随便选,时间对应为35min-18min,有疑问随便问。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

有你真好
7楼2015-07-28 15:07:58
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草溪河

铁虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-28 22:57:17
降解了,建议跑电泳时电压大一些,时间控制住10-15分钟,再看看。看看是哪一步降解了。
5楼2015-07-28 10:05:55
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-28 22:57:43
你的样品应该够新鲜的,要注意低温破碎。提取RNA,氯仿振荡那一步特别重要,振荡要激烈,离心后坚决不能吸到沉淀。
8楼2015-07-28 16:10:56
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普通回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
降解成这样,还是重来吧

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-07-27 23:24:35
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13steve

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-07-27 23:24:35
降解成这样,还是重来吧

嗯,请问胶图正常的话我的mRNA应该是在什么位置?
3楼2015-07-28 08:51:25
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

真是疯了,mRNA跑电泳,好浪费啊

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-07-28 08:53:59
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
13steve: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢 2015-07-28 17:34:18
楼上别闹,瞎说,看到图只能说,且做且珍惜。
提取RNA根本都不难,我觉得你应该提取的是总RNA,市场上买的试剂盒多的去了。
进口的一大推TAKARA,QIGEN等,国产的全式金,康为, 天恩,生工等,随便哪个提取的总RNA质量都是杠杠的,
这些本人都用过。
条带时3条带,真核生物28S、18S和5S,没有降解的RNA条带时28S亮度是18S亮度的2倍,5S很弱。
不懂的话,继续问吧,只要严格按照试剂盒说明书提取,速度能有多快有多快,降解往往是慢引起的,和温度关系不大。
有你真好
6楼2015-07-28 15:03:58
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13steve

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-07-28 08:53:59
真是疯了,mRNA跑电泳,好浪费啊

不用跑吗?只测浓度?
9楼2015-07-28 17:25:21
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great07225388

新虫 (著名写手)

徒手裸提rna,绝对是技术活啊!

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2015-07-28 17:28:17
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