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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 求助，关于玉米原生质体转化后的浓度问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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conanyangqun

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，关于玉米原生质体转化后的浓度问题 已有1人参与

各位虫友，本虫最近在用玉米的原生质体做亚细胞定位的实验。按照sheen lab的方法，做了10次左右，只成功过一次。遇到的问题如下：
已经成功提取到了健康的原生质体，500ul MMg重悬后在10X的物镜下大约有200-300个原生质体。然后取100ul加10ug质粒、110ul PEG转化，转化完毕用450ul W5溶液终止反应，之后离心去除PEG。再转移到6孔板上，用1ml W5暗培养。8h后制片观察。
发现，在10X的物镜下，一张片子几乎看不到几个原生质体。请问这是怎么回事啊？原生质体都破碎了么？
将1ml转化后的离心去除大部分溶液后，再次制片，这样在10X的物镜下一个视野可以看到4-5个原生质体。
请问各位虫友，是原生质体的浓度太低么？在转化的时候加入的原生质体应该有很多吧，是都破碎了么？
急等！谢谢！
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1楼 2015-07-27 15:51:47
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conanyangqun

新虫 (初入文坛)
自己顶一下，没人做过么？
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2楼2015-08-02 21:54:50
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

即使原生质体破碎应该也是能看到碎片的，本身细胞状态是能看得出来的，我没有分过玉米的，应该比拟南芥难的多吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
3楼2015-08-03 09:40:01
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妙儿2008

新虫 (正式写手)
楼主，您好！我想请问一下，可否说一下你提取玉米原生质体的方法？我们之前做的都是大量的碎片？转化成功率不高？
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4楼2016-01-12 20:17:44
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conanyangqun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 妙儿2008 at 2016-01-12 20:17:44
楼主，您好！我想请问一下，可否说一下你提取玉米原生质体的方法？我们之前做的都是大量的碎片？转化成功率不高？

提取原生质体的方法用的就是sheen 的拟南芥提取的方案。材料用的是玉米黄花苗。材料的用量我并没有固定，用的比较多。导师说多一些好。碎片我提取的倒也有，不过原生质体浓度也不低。
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5楼2016-01-30 11:25:52
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conanyangqun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 妙儿2008 at 2016-01-12 20:17:44
楼主，您好！我想请问一下，可否说一下你提取玉米原生质体的方法？我们之前做的都是大量的碎片？转化成功率不高？

我做的时候原生质体提取的还算可以，就是用PEG转化完毕之后，视野里见到的原生质体不多。不知道是什么原因造成的。
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6楼2016-01-30 11:27:34
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仙紫魅影

新虫 (初入文坛)
您好，我想问下，现在您做的原生质体转化怎么样？问题解决没呢？我也遇到了同样问题，后期原生质体培养后，全破碎了
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7楼2017-06-20 10:29:38
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