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求助，关于玉米原生质体转化后的浓度问题 已有1人参与
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各位虫友，本虫最近在用玉米的原生质体做亚细胞定位的实验。按照sheen lab的方法，做了10次左右，只成功过一次。遇到的问题如下： 已经成功提取到了健康的原生质体，500ul MMg重悬后在10X的物镜下大约有200-300个原生质体。然后取100ul加10ug质粒、110ul PEG转化，转化完毕用450ul W5溶液终止反应，之后离心去除PEG。再转移到6孔板上，用1ml W5暗培养。8h后制片观察。 发现，在10X的物镜下，一张片子几乎看不到几个原生质体。请问这是怎么回事啊？原生质体都破碎了么？ 将1ml转化后的离心去除大部分溶液后，再次制片，这样在10X的物镜下一个视野可以看到4-5个原生质体。 请问各位虫友，是原生质体的浓度太低么？在转化的时候加入的原生质体应该有很多吧，是都破碎了么？ 急等！谢谢！ |
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