24小时热门版块排行榜    

查看: 588  |  回复: 10
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 cohnii 的 10 个金币

cohnii

银虫 (小有名气)

[交流] 关于TA克隆

请教大家:
我刚做分子生物学,准备利用18S鉴定一种真菌。
PCR产物做出来纯化后都很正常,差不多1800bp
将其连接到pMD 18-T载体上后
准备跑胶看看有没有连接成功
结果发现在4500条带的后面竟然有三四个条带
做了两遍连接,还是一样。
不知道是怎么回事?希望听听大家的看法和建议,先谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mark32280667806

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复,欢迎常来
你是抽质粒检测的还是直接用快速检测的方法检测的呢?如果是手抽质粒的话,有3-4条带都是正常的现象,分别代表超螺旋,线性和却可的质粒,若果是用快速检测的方法检测质粒(或者是用试剂盒抽的质粒),正常情况是两条带,好的情况是一条带!!!
2楼2008-08-09 14:10:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mark32280667806

若果有图的话,可以将图附上,也好更详细的帮你分析分析
3楼2008-08-09 14:11:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cohnii

银虫 (小有名气)

我是用连接产物跑的胶,觉得不正常,就没有往下面做
一般与T载体连接后应该有几条带呢?
附件是我的图,Marker是4500的
最前面的应该是我要连接的片段
后面条带太多了。。
4楼2008-08-09 14:35:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cohnii

银虫 (小有名气)

图没有传上去,网速太慢了
5楼2008-08-09 15:54:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

exit147

木虫 (著名写手)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):谢谢耐心答复,欢迎常来
引用回帖:
Originally posted by cohnii at 2008-8-9 14:35:
我是用连接产物跑的胶,觉得不正常,就没有往下面做
一般与T载体连接后应该有几条带呢?
附件是我的图,Marker是4500的
最前面的应该是我要连接的片段
后面条带太多了。。

我们实验室一般没有人连接后直接电泳检测的,正常程序是转化后提质粒跑胶验证,或者菌落pcr验证
秋风生渭水,落叶满长安。
6楼2008-08-09 16:13:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

exit147

木虫 (著名写手)

“在4500条带的后面竟然有三四个条带"

从没见过这样的情况,真奇怪,转化大肠杆菌很快的,你转化之后,在检测试试

后面的条带会会是多个片段和载体连一起了,或者连成线状了?我猜的。
秋风生渭水,落叶满长安。
7楼2008-08-09 16:19:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

darkblue111

铜虫 (初入文坛)

直接转化,涂平板不就知道连没连上了,浪费也就浪费一天时间
8楼2008-08-09 17:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cohnii

银虫 (小有名气)

再把电泳图传一下
9楼2008-08-09 19:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peng5053

银虫 (正式写手)

Dr.

很明显,你的连接发生了自连现象,可能你的片段不够纯的原因吧!建议你做完连接后做转化,在切下来纯化后做连接。理论上你的做法是可以找到你需要的东西的,但是在实际中,当片段不够纯的时候,自连现象很严重,而且很少能找到你需要的东西
多点思维,多点idea
10楼2008-09-13 03:08:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cohnii 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见