24小时热门版块排行榜    

查看: 605  |  回复: 10
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 cohnii 的 10 个金币

cohnii

银虫 (小有名气)

[交流] 关于TA克隆

请教大家:
我刚做分子生物学,准备利用18S鉴定一种真菌。
PCR产物做出来纯化后都很正常,差不多1800bp
将其连接到pMD 18-T载体上后
准备跑胶看看有没有连接成功
结果发现在4500条带的后面竟然有三四个条带
做了两遍连接,还是一样。
不知道是怎么回事?希望听听大家的看法和建议,先谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mark32280667806

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复,欢迎常来
你是抽质粒检测的还是直接用快速检测的方法检测的呢?如果是手抽质粒的话,有3-4条带都是正常的现象,分别代表超螺旋,线性和却可的质粒,若果是用快速检测的方法检测质粒(或者是用试剂盒抽的质粒),正常情况是两条带,好的情况是一条带!!!
2楼2008-08-09 14:10:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mark32280667806

若果有图的话,可以将图附上,也好更详细的帮你分析分析
3楼2008-08-09 14:11:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cohnii

银虫 (小有名气)

我是用连接产物跑的胶,觉得不正常,就没有往下面做
一般与T载体连接后应该有几条带呢?
附件是我的图,Marker是4500的
最前面的应该是我要连接的片段
后面条带太多了。。
4楼2008-08-09 14:35:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cohnii

银虫 (小有名气)

图没有传上去,网速太慢了
5楼2008-08-09 15:54:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

exit147

木虫 (著名写手)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):谢谢耐心答复,欢迎常来
引用回帖:
Originally posted by cohnii at 2008-8-9 14:35:
我是用连接产物跑的胶,觉得不正常,就没有往下面做
一般与T载体连接后应该有几条带呢?
附件是我的图,Marker是4500的
最前面的应该是我要连接的片段
后面条带太多了。。

我们实验室一般没有人连接后直接电泳检测的,正常程序是转化后提质粒跑胶验证,或者菌落pcr验证
秋风生渭水,落叶满长安。
6楼2008-08-09 16:13:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

exit147

木虫 (著名写手)

“在4500条带的后面竟然有三四个条带"

从没见过这样的情况,真奇怪,转化大肠杆菌很快的,你转化之后,在检测试试

后面的条带会会是多个片段和载体连一起了,或者连成线状了?我猜的。
秋风生渭水,落叶满长安。
7楼2008-08-09 16:19:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

darkblue111

铜虫 (初入文坛)

直接转化,涂平板不就知道连没连上了,浪费也就浪费一天时间
8楼2008-08-09 17:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cohnii

银虫 (小有名气)

再把电泳图传一下
9楼2008-08-09 19:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peng5053

银虫 (正式写手)

Dr.

很明显,你的连接发生了自连现象,可能你的片段不够纯的原因吧!建议你做完连接后做转化,在切下来纯化后做连接。理论上你的做法是可以找到你需要的东西的,但是在实际中,当片段不够纯的时候,自连现象很严重,而且很少能找到你需要的东西
多点思维,多点idea
10楼2008-09-13 03:08:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cohnii 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 8/400 2026-08-18 11:47 by gltch
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 5/250 2026-08-18 11:25 by 無關想念
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +43 医学老男孩 2026-08-13 97/4850 2026-08-18 11:07 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +5 基诺咪客 2026-08-17 6/300 2026-08-18 11:06 by hunter无悔
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
请填处理意见