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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于TA克隆
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cohnii

银虫 (小有名气)

[交流] 关于TA克隆

请教大家：
我刚做分子生物学，准备利用18S鉴定一种真菌。
PCR产物做出来纯化后都很正常，差不多1800bp
将其连接到pMD 18-T载体上后
准备跑胶看看有没有连接成功
结果发现在4500条带的后面竟然有三四个条带
做了两遍连接，还是一样。
不知道是怎么回事？希望听听大家的看法和建议，先谢谢！
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1楼 2008-08-09 13:51:37
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exit147

木虫 (著名写手)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):谢谢耐心答复，欢迎常来
引用回帖:
Originally posted by cohnii at 2008-8-9 14:35:
我是用连接产物跑的胶，觉得不正常，就没有往下面做
一般与T载体连接后应该有几条带呢？
附件是我的图，Marker是4500的
最前面的应该是我要连接的片段
后面条带太多了。。

我们实验室一般没有人连接后直接电泳检测的，正常程序是转化后提质粒跑胶验证，或者菌落pcr验证
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秋风生渭水，落叶满长安。
6楼2008-08-09 16:13:34
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mark32280667806

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复，欢迎常来
你是抽质粒检测的还是直接用快速检测的方法检测的呢？如果是手抽质粒的话，有3-4条带都是正常的现象，分别代表超螺旋，线性和却可的质粒，若果是用快速检测的方法检测质粒（或者是用试剂盒抽的质粒），正常情况是两条带，好的情况是一条带！！！
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2楼2008-08-09 14:10:25
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mark32280667806

若果有图的话，可以将图附上，也好更详细的帮你分析分析
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3楼2008-08-09 14:11:07
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cohnii

银虫 (小有名气)
我是用连接产物跑的胶，觉得不正常，就没有往下面做
一般与T载体连接后应该有几条带呢？
附件是我的图，Marker是4500的
最前面的应该是我要连接的片段
后面条带太多了。。
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4楼2008-08-09 14:35:38
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