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如何获得一段约127bp的DNA双链片段？已有1人参与
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各位虫右：我最近构建质粒需要将一段约127bp的片段连入载体（载体使用两个限制性内切酶酶切处理），现在比较纠结以下两种办法：①设计两条互搭长引物，将引物直接退火，形成双链DNA片段（两端有与载体相同的粘性末端），可以直接连入载体。但有一个问题是长引物直接互搭的效率如何？会不会得到引物二聚体的可能性更高？ ②第二种办法是利用PCR扩增出这条127bp的DNA片段连入T载体后，利用相同的限制性内切酶酶切后连入载体。但存在的问题是127bp的DNA片段的回收问题，片段太小是否不易回收？希望有经验的虫虫能帮助一下！谢谢！ |
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