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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何获得一段约127bp的DNA双链片段？
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红塔山和云烟

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何获得一段约127bp的DNA双链片段？ 已有1人参与

各位虫右：我最近构建质粒需要将一段约127bp的片段连入载体（载体使用两个限制性内切酶酶切处理），现在比较纠结以下两种办法：①设计两条互搭长引物，将引物直接退火，形成双链DNA片段（两端有与载体相同的粘性末端），可以直接连入载体。但有一个问题是长引物直接互搭的效率如何？会不会得到引物二聚体的可能性更高？
②第二种办法是利用PCR扩增出这条127bp的DNA片段连入T载体后，利用相同的限制性内切酶酶切后连入载体。但存在的问题是127bp的DNA片段的回收问题，片段太小是否不易回收？希望有经验的虫虫能帮助一下！谢谢！
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1楼 2015-07-19 15:03:00
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halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)

这是啥？

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以考虑全基因合成啊，也不贵啊
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现在我们能做的就是努力努力再努力
2楼2015-07-19 16:14:28
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红塔山和云烟

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by halfbeer at 2015-07-19 16:14:28
你可以考虑全基因合成啊，也不贵啊

谢谢！基因合成也有考虑过，现在的问题是怎么把片段连到载体上。
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3楼2015-07-19 16:53:00
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halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)

这是啥？

【答案】应助回帖

★ ★
红塔山和云烟: 金币+2, ★有帮助 2015-07-20 09:58:29
引用回帖:
3楼: Originally posted by 红塔山和云烟 at 2015-07-19 16:53:00
谢谢！基因合成也有考虑过，现在的问题是怎么把片段连到载体上。...

合成的时候加上酶切位点

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现在我们能做的就是努力努力再努力
4楼2015-07-19 23:10:53
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零时以南

新虫 (小有名气)
小片段怎么回收

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5楼2018-03-10 07:11:42
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