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求教大神：植物组织中H2S含量的测定方法 已有2人参与
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求教哪位大神做过植物组织中H2S含量的测定，希望可以告知实验中具体用到的药品和试剂以及实验操作步骤！在此感激不尽！！ |
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starseacow
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
宣煊: 金币+5, ★★★很有帮助, 提供的做法可以作为参考， 2015-07-18 09:40:30
感谢参与，应助指数 +1
宣煊: 金币+5, ★★★很有帮助, 提供的做法可以作为参考， 2015-07-18 09:40:30
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Measurement of H2S content H2S quantification was performed as described by Nashef et al. (1977). The chemical treatments were the same as the measurements of Na+ and K+ contents. Following the treatments, the root of seedlings were ground into fine powder with a mortar and pestle under liquid nitrogen and 0.3 g of frozen tissue were homogenized in 1 ml 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7) containing 10 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA). The homogenate was centrifuged at 15,000×g for 20 min at 4 °C, and 100 μl of the supernatant was used for the quantification of H2S, in an assay mixture also containing 1,880 μl extraction buffer and 20 μl 20 mM 5,5′- dithiobis (2-nitrobenzoic acid), to a total volume of 2 ml. The assay mixture was incubated at room temperature for 2 min and the absorbance was read at 412 nm. H2S was quantified based on a standard curve of known concentrations of NaHS 本段出自 Hydrogen sulfide is involved in maintaining ion homeostasis via regulating plasma membrane Na+/H+ antiporter system in the hydrogen peroxide-dependent manner in salt-stress Arabidopsis thaliana root Protoplasma (2014) 251:899–912 |
2楼2015-07-17 21:42:00
宣煊
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3楼2015-07-18 09:41:59
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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内源H2S含量测定方法: 1)试剂 a, 磷酸缓冲液（PH 6.8）50 mM(含0.1M EDTA 和 0.2 M 抗坏血酸 ) b, PBS PH 7.4 100 mM c, L- Cys 10 mM d, 磷酸吡哆醛 2 mM e, 二甲基对本二胺 5mM（溶入3.5 mM H2SO4） f, 硫酸铁铵 50 mM (溶入100 mM H2SO4) g, Na2S 溶液（配成已知浓度梯度） 2）绘制标准曲线 称取Na2S 9H2O 0.2402g 加新沸冷却的dd water定容至100ml. 取a 将其稀释为0.5、1、2、4、8、16 μM 测已知浓度Na2S 670 nm吸光值，绘制标准曲线 3）测样品中H2S含量 取0.5 g 样品在5 ml a中冰浴研磨 将匀浆与b,c,d 混合，室温放置，离心取上清 将装有醋酸锌的吸收井置于装有上清的小测试管中，反应30 min 加0.3 ml e 加0.3 ml f |
4楼2015-07-19 11:30:29
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
宣煊: 金币+5, ★★★很有帮助, 方法详实，具有较大参考价值 2015-07-19 18:00:41
宣煊: 金币+5, ★★★很有帮助, 方法详实，具有较大参考价值 2015-07-19 18:00:41
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将试管用封口膜迅速封好，于37 度反应15 min 670 nm 测吸光值 参考Journal of Integrative Plant Biology 2008, 50 (12): 1518–1529 ， 按照文献翻译过来尝试做过，但没有成功，弄不清楚那个吸收装置是怎么弄的，楼主可以参考下我的  ，自己仔细看看文献，如果楼主成功了，请不吝分享 PS: 另有文献说可以用气相色谱法和电极法，我们这边没条件做，楼主如果有条件可以查阅相关文献 另现在有荧光探针可以定性 祝好运 |
5楼2015-07-19 11:40:06
宣煊
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非常非常感谢！我找到了参考文献，就是具体的做法还不大清楚，我会先试着做一下的。如果能成功定会与你分享！6楼2015-07-19 18:04:06
