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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 求教大神：植物组织中H2S含量的测定方法
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宣煊

木虫 (小有名气)

超级木虫

[求助] 求教大神：植物组织中H2S含量的测定方法 已有2人参与

求教哪位大神做过植物组织中H2S含量的测定，希望可以告知实验中具体用到的药品和试剂以及实验操作步骤！在此感激不尽！！
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__________失之坦然，得之淡然。。
1楼 2015-07-17 20:14:53
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
宣煊: 金币+5, ★★★很有帮助, 提供的做法可以作为参考， 2015-07-18 09:40:30
Measurement of H2S content
H2S quantification was performed as described by Nashef
et al. (1977). The chemical treatments were the same as the
measurements of Na+ and K+ contents. Following the treatments,
the root of seedlings were ground into fine powder with
a mortar and pestle under liquid nitrogen and 0.3 g of frozen
tissue were homogenized in 1 ml 100 mM potassium phosphate
buffer (pH 7) containing 10 mM ethylenediaminetetraacetic
acid (EDTA). The homogenate was centrifuged at
15,000×g for 20 min at 4 °C, and 100 μl of the supernatant
was used for the quantification of H2S, in an assay mixture also
containing 1,880 μl extraction buffer and 20 μl 20 mM 5,5′-
dithiobis (2-nitrobenzoic acid), to a total volume of 2 ml. The
assay mixture was incubated at room temperature for 2 min
and the absorbance was read at 412 nm. H2S was quantified
based on a standard curve of known concentrations of NaHS

本段出自
Hydrogen sulfide is involved in maintaining ion homeostasis via regulating plasma membrane Na+/H+ antiporter system in the hydrogen peroxide-dependent manner in salt-stress Arabidopsis thaliana root
Protoplasma (2014) 251:899–912
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2015-07-17 21:42:00
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宣煊

木虫 (小有名气)

超级木虫
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-07-17 21:42:00
Measurement of H2S content
H2S quantification was performed as described by Nashef
et al. (1977). The chemical treatments were the same as the
measurements of Na+ and K+ contents. Following the tr ...

非常感谢！！只是对于具体的操作方法还是不太清楚呢。。
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__________失之坦然，得之淡然。。
3楼2015-07-18 09:41:59
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月半弯弯

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
内源H2S含量测定方法:
1)试剂 a, 磷酸缓冲液（PH 6.8）50 mM(含0.1M EDTA 和 0.2 M 抗坏血酸 )
           b, PBS PH 7.4 100 mM
           c, L- Cys 10 mM
           d, 磷酸吡哆醛 2 mM
           e, 二甲基对本二胺 5mM（溶入3.5 mM H2SO4）
       f, 硫酸铁铵   50 mM (溶入100 mM H2SO4)
           g, Na2S 溶液（配成已知浓度梯度）
2）绘制标准曲线
   称取Na2S 9H2O 0.2402g 加新沸冷却的dd water定容至100ml.
     取a 将其稀释为0.5、1、2、4、8、16 μM
     测已知浓度Na2S 670 nm吸光值，绘制标准曲线
3）测样品中H2S含量
   取0.5 g 样品在5 ml a中冰浴研磨
   将匀浆与b,c,d 混合，室温放置，离心取上清
   将装有醋酸锌的吸收井置于装有上清的小测试管中，反应30 min
     加0.3 ml e
     加0.3 ml f
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生命在孜孜不倦中呈现本色
4楼2015-07-19 11:30:29
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月半弯弯

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
宣煊: 金币+5, ★★★很有帮助, 方法详实，具有较大参考价值 2015-07-19 18:00:41
将试管用封口膜迅速封好，于37 度反应15 min
    670 nm 测吸光值
  
参考Journal of Integrative Plant Biology 2008, 50 (12): 1518–1529 ，
按照文献翻译过来尝试做过，但没有成功，弄不清楚那个吸收装置是怎么弄的，楼主可以参考下我的，自己仔细看看文献，如果楼主成功了，请不吝分享

PS: 另有文献说可以用气相色谱法和电极法，我们这边没条件做，楼主如果有条件可以查阅相关文献
   另现在有荧光探针可以定性

祝好运
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生命在孜孜不倦中呈现本色
5楼2015-07-19 11:40:06
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宣煊

木虫 (小有名气)

超级木虫
引用回帖:
5楼: Originally posted by 月半弯弯 at 2015-07-19 11:40:06
将试管用封口膜迅速封好，于37 度反应15 min
    670 nm 测吸光值
  
参考Journal of Integrative Plant Biology 2008, 50 (12): 1518–1529 ，
按照文献翻译过来尝试做过，但没有成功，弄不清楚那个吸收装置是 ...

非常非常感谢！我找到了参考文献，就是具体的做法还不大清楚，我会先试着做一下的。如果能成功定会与你分享！
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__________失之坦然，得之淡然。。
6楼2015-07-19 18:04:06
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