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dss诱导c57小鼠结肠炎模型提结肠RNA做real time pcr，为什么连内参都测不出ct值？ 已有1人参与
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我最近在做2%dss诱导的结肠炎小鼠模型，首先强调一下，我实验中用的所有方法，引物，试剂盒不是来自相关文献中就是实验室已经用了很长时间的，我个人也做过非常多的提组织RNA做real time pcr的经验。可这次实在是没办法了，只好来问问大家。 我是看了多篇博士论文和SCI文献，按它们的方法取的结肠组织，然后加trizol研磨提取RNA，DNA酶1处理后逆转录成cDNA，做real time pcr。为了结果更可靠，我特意同时处理了一只没有给药，普通饲养的小鼠。 结果非常奇怪。我用的所有引物都来自SCI文献，这些文献都是做的dss肠炎模型，小鼠品系跟我也一样。可我的小鼠就是跑不出来结果，ct值测不出来，关键连内参都跑不出来，我的cDNA上样量每个孔从1ug到5ug以上都试过了，全部都测不出ct值。可同时做的那个正常小鼠的结果就非常好。我RNA都提了两批啦，仪器也用过ABI7500和Biorad的，我同期还做了另一个课题的皮肤组织的real time pcr也没有问题。我甚至重新做了一批肠炎小鼠，从头重新做还是不行。 想问问肠炎小鼠的RT-PCR有什么特殊之处吗？我内参都换了三种啦，这三种都是最新的跟我同品系小鼠dss肠炎模型的SCI文献中用的呀！为什么就是做不出来？ |
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2楼2015-07-14 00:08:11
halfbeer
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wangzhe1124
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