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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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俊松ing

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 各位虫友,我最近在克隆某基因的CDS区,但是它有3.5kb左右,总是P不出来 已有5人参与

各位虫友,我最近在克隆某基因的CDS区,但是它有3.5kb左右,总是P不出来,换了各种模板都不行。我该怎么办?有没有推荐的RT试剂盒或者什么方法啊?求教!
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wsad5213

实习版主

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
俊松ing: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-09 21:22:50
你要想克隆基因,最关键的是提取RNA的质量,以及反转录的质量!我们克隆基因都是分为3个步骤,中间片段的扩增,3`序列扩增,以及5`序列的扩增!如果你中间片段都没有扩增出来那么问题只有两个,第一你取样的部位可能该基因不表达,第二你引物有问题!扩增出中间片段后用试剂盒扩增两端就可以了!总之一定要保证RNA质量
7楼2015-07-09 16:33:59
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俊松ing

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

自己先顶一下!大家来帮忙啊!
如果你有梦想、全世界都会帮你实现
2楼2015-07-08 10:34:36
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nonglong1

兑换贵宾

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
俊松ing: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-08 18:47:55
首先你要保证提的RNA和反转的CDNA质量好,无降解。如果能知道这个基因在哪个组织或是条件下表达高就用那个样品的cDNA最好了。然后买一个扩长片段的PCR酶,试剂代理商肯定有卖的。
祝好运,求金币。
植物学
3楼2015-07-08 16:40:17
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Neo2000

主管区长

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
俊松ing: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-08 18:48:08
什么材料?RNA好不好,引物设计过关了没?这些都是关键

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-07-08 18:06:13
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