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whb21

木虫 (著名写手)

[求助] 蛋白纯化 已有1人参与

最近在做一个重组蛋白的纯化 pi9.2左右 采用tris ph10 上deae 蛋白挂柱不好 流穿较多 采用tris 7.0 上sp 结果同样 好苦恼 求大神指教

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-07-04 00:03:10
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DEAE可以挂上部分目的蛋白，说明可以做些优化。看下过DEAE时最大的洗脱峰是什么东西，如果是杂蛋白就可以在过柱前先粗纯，如果是DNA或其他杂质就先把这些干扰去掉，再就是调整离子强度了，把电导调低些看看。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

whb21
2楼2015-07-04 10:42:03
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whb21

木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2015-07-04 10:42:03
DEAE可以挂上部分目的蛋白，说明可以做些优化。看下过DEAE时最大的洗脱峰是什么东西，如果是杂蛋白就可以在过柱前先粗纯，如果是DNA或其他杂质就先把这些干扰去掉，再就是调整离子强度了，把电导调低些看看。

我过DEAE时发现 低浓度NaCl可将目的蛋白洗下来，当然其中也有一些杂蛋白，高浓度NaCl时基本没有目的蛋白，我所使用的buffer是20mM Tris ph10 电导比较低了 但流穿中仍有大量目的蛋白，好苦恼.....目的蛋白挂柱效率低.....
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3楼2015-07-04 21:01:04
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小小sao年

金虫 (小有名气)
你样品电导多少？稀释了吗？调ph了吗

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4楼2015-07-07 09:26:50
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小小sao年 at 2015-07-07 09:26:50
你样品电导多少？稀释了吗？调ph了吗

sp柱 电导0.6 ph567都试过 全不挂柱子

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2015-07-08 11:37:09
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