| 查看: 1336 | 回复: 1 | |||
michacel1217银虫 (小有名气)
|
[求助]
肠激酶酶切咨询已有1人参与
|
| 之前构建了一个带有肠激酶酶切位点的融合蛋白，经表达、纯化后使用肠激酶酶切后发现有大量的蛋白沉淀，后来又跑了蛋白胶，发现几乎所有蛋白都集中在沉淀中，其中酶切条件为4℃ 24h，请大神指点一二！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化鉴定精华 |
» 本帖@通知
@凌波丽
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有289人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助肠激酶酶切融合蛋白
已经有8人回复
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4334.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
从肠激酶处理后跑的蛋白沉淀PAGE上看，处理后的沉淀蛋白大小是否在切割标签后蛋白的理论大小位置附近？上清中是否能检测到标签？能否通过PAGE初步判断肠激酶成功将标签切下来？ 若上面可以初步判断成功切割标签，表明你去除标签的蛋白在当前溶液环境下无法有效溶解。可能有用的措施有:1.在肠激酶处理前，分几个梯度稀释你的蛋白样品，筛查合适的样品浓度。2.稀释肠激酶，分几个酶活梯度处理你的样品，控制肠激酶的切割速率。3.调整一下溶液的pH，避免在蛋白的pI值附近，4.将肠激酶稀释后可适当调高反应温度，避免温度过低。 若上述方法不足以解决问题，则需要加入助溶剂辅助溶解或进行蛋白复性处理。 [ 发自小木虫客户端 ] |
2楼2015-06-30 04:09:33