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bindeng

金虫 (小有名气)

[求助] 筛选慢病毒转染4T1细胞已有1人参与

各位大神,我正在做慢病毒转染4T1细胞,希望基因导入了细胞中,但是在用puro筛选的时候,细胞全部死了, 对照没有死,所以用的puro浓度是应该是对的。求各位大神指点迷津,跪谢。
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 22:04:21
我现在刚好也在做同样的实验,加完puro是有细胞活下来的;还需进一步验证。楼主是否转过其他鼠源细胞?成功过否?是否有可能你做的基因在鼠里面有不同的调控靶点和方式导致以上结果?
6楼2015-06-23 14:57:18
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

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★ ★ ★ ★ ★
bindeng: 金币+5, 有帮助 2015-06-24 09:15:34
我做的基因是一个转录因子,它通过结合目标基因的启动子来调控下游目标基因的转录。在人的细胞里面这种情况基本上是差不多的。但我发现鼠源细胞中这个目标基因的启动子跟人源的基本上没有相似性,所以想要做一下看在鼠细胞中是否有类似情况。不知我的情况能否对你做的基因有参考作用。我想说,因为如果你之前全做的是人细胞,可能在鼠里面会很不一样。如果你之前也做过其他鼠源细胞的话,那就需要再想想是什么问题了。
8楼2015-06-24 00:43:15
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

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★ ★ ★ ★ ★
bindeng: 金币+5 2015-06-24 17:16:40
一个解释就是如果你这个基因过表达了就可以在鼠源细胞里面调控一个可能致死的基因表达改变(比如在我的情况里,假设鼠细胞中一个可以促凋亡的基因刚好能被我转染的基因调控,而人细胞中由于启动子由于没有结合序列不能被调控)。那就有可能出现这种情况,即表达基因的死了,空载体的没死。如果真的是这种情况就不好办了,可能的受调控又能致死的基因可能性太多。有条件的话做裸鼠种人源细胞是一个可以绕过这种可能的方法。
11楼2015-06-24 15:11:59
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