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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 筛选慢病毒转染4T1细胞
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bindeng

金虫 (小有名气)

[求助] 筛选慢病毒转染4T1细胞 已有1人参与

各位大神，我正在做慢病毒转染4T1细胞，希望基因导入了细胞中，但是在用puro筛选的时候，细胞全部死了， 对照没有死，所以用的puro浓度是应该是对的。求各位大神指点迷津，跪谢。
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1楼 2015-06-20 15:36:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小小逍遥人

金虫 (正式写手)

张斌猪
你这个是沉默还是过表达
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生命还需要奇迹来衬托
2楼2015-06-22 00:22:14
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 22:04:21
我现在刚好也在做同样的实验，加完puro是有细胞活下来的；还需进一步验证。楼主是否转过其他鼠源细胞？成功过否？是否有可能你做的基因在鼠里面有不同的调控靶点和方式导致以上结果？
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6楼2015-06-23 14:57:18
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bindeng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小逍遥人 at 2015-06-22 00:22:14
你这个是沉默还是过表达

表达  就是希望导入的基因在细胞里面表达
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3楼2015-06-22 09:54:45
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小小逍遥人

金虫 (正式写手)

张斌猪
引用回帖:
3楼: Originally posted by bindeng at 2015-06-22 09:54:45
表达  就是希望导入的基因在细胞里面表达...

那就估计是你筛选方式选择错误了   说白了  你这个过表达之后筛选细胞就会死
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生命还需要奇迹来衬托
4楼2015-06-23 00:01:17
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bindeng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小小逍遥人 at 2015-06-23 00:01:17
那就估计是你筛选方式选择错误了   说白了  你这个过表达之后筛选细胞就会死...

应该不会吧  之前也转染了其它细胞  筛选都成功了   现在就是转染4T1细胞  然后对照的是没带目的基因的  也活了啊   就是带有目的基因的就没有活的
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5楼2015-06-23 08:51:48
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bindeng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by junior850621 at 2015-06-23 14:57:18
我现在刚好也在做同样的实验，加完puro是有细胞活下来的；还需进一步验证。楼主是否转过其他鼠源细胞？成功过否？是否有可能你做的基因在鼠里面有不同的调控靶点和方式导致以上结果？

之前有做其它细胞  是成功的  而且做4T1时候   相同慢病毒转染的  没带目的基因的  有活着的  带目的基因的  就没有活
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7楼2015-06-23 16:11:28
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
bindeng: 金币+5, ★有帮助 2015-06-24 09:15:34
我做的基因是一个转录因子，它通过结合目标基因的启动子来调控下游目标基因的转录。在人的细胞里面这种情况基本上是差不多的。但我发现鼠源细胞中这个目标基因的启动子跟人源的基本上没有相似性，所以想要做一下看在鼠细胞中是否有类似情况。不知我的情况能否对你做的基因有参考作用。我想说，因为如果你之前全做的是人细胞，可能在鼠里面会很不一样。如果你之前也做过其他鼠源细胞的话，那就需要再想想是什么问题了。
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8楼2015-06-24 00:43:15
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bindeng

金虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by junior850621 at 2015-06-24 00:43:15
我做的基因是一个转录因子，它通过结合目标基因的启动子来调控下游目标基因的转录。在人的细胞里面这种情况基本上是差不多的。但我发现鼠源细胞中这个目标基因的启动子跟人源的基本上没有相似性，所以想要做一下看在 ...

好的  谢谢
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9楼2015-06-24 09:16:16
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bindeng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by junior850621 at 2015-06-24 00:43:15
我做的基因是一个转录因子，它通过结合目标基因的启动子来调控下游目标基因的转录。在人的细胞里面这种情况基本上是差不多的。但我发现鼠源细胞中这个目标基因的启动子跟人源的基本上没有相似性，所以想要做一下看在 ...

我们之前做的是人细胞  是成功的   那么您觉得应该存在什么问题呢？？如何改进？还有  为什么没带目的基因的慢病毒转染是成功的呢？
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10楼2015-06-24 09:18:48
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