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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 大肠杆菌超声破壁的裂解液中溶菌酶要怎么加？
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Rivermm

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌超声破壁的裂解液中溶菌酶要怎么加？ 已有3人参与

现在要配一个超声破壁的裂解液，根据实验指导要加溶菌酶，想问一下大家，加溶菌酶的话是可以直接加粉末，还是要配成溶液再加呢？
以及配裂解液的时候是不是最好先把其他的药品加好，溶菌酶的话现用现加，如果配的时候把溶菌酶一起加进去，那裂解液要怎么保存？
先谢谢啦？
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1楼 2015-06-11 14:00:10
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kaifu123

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Rivermm: 金币+2 2015-07-21 10:00:22
Rivermm: 金币+4 2015-07-21 10:00:58
本帖内容被屏蔽
2楼2015-06-11 14:39:57
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Rivermm: 金币+2 2015-07-21 10:00:27
我们破大肠杆菌根本不用溶菌酶，直接破就可以了
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Rivermm
3楼2015-06-11 16:05:58
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千山万水T

铜虫 (初入文坛)
直接用PBS破碎，和加溶菌酶效果一样

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-06-11 20:27:35
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小_菜鸟

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
Rivermm: 金币+2 2015-07-21 10:00:45
我们的做法是，先配制10g/L也就是10mg/mL的溶菌酶，等要用超声波破碎的时候，加入终浓度为0.1mg/mL溶菌酶，放到4℃里反应20Min，再进行超声，效果还不错。
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Rivermm
5楼2015-07-01 23:12:36
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Rivermm

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaifu123 at 2015-06-11 14:39:57
0.2g溶菌酶溶解到10ml 10mmol/L Tris•Cl(pH8.0),分装成1ml/小份,保存于-20℃， 工作浓度1-2mg/ml就可以，在超声前作用十几分钟就可以了。大肠杆菌很容易超声破碎的，我直接用的PBS重悬菌体。破碎过程中保持低 ...

PBS的pH有要求吗，超声破壁之后的离心我找到的文献上边说要27000g，必须要这么高的转速吗，你离心用的多大转速，离多久啊，谢谢啦！
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6楼2015-07-21 09:59:52
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Rivermm

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小花木兰 at 2015-06-11 16:05:58
我们破大肠杆菌根本不用溶菌酶，直接破就可以了

超声破壁之后的离心我找到的文献上边说要27000g，必须要这么高的转速吗，你离心用的多大转速，离多久啊，谢谢啦！
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7楼2015-07-21 10:01:30
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Rivermm

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小_菜鸟 at 2015-07-01 23:12:36
我们的做法是，先配制10g/L也就是10mg/mL的溶菌酶，等要用超声波破碎的时候，加入终浓度为0.1mg/mL溶菌酶，放到4℃里反应20Min，再进行超声，效果还不错。

超声破壁之后的离心我找到的文献上边说要27000g，必须要这么高的转速吗，你离心用的多大转速，离多久啊，谢谢啦！
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8楼2015-07-21 10:01:47
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东东魔神

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小花木兰 at 2015-06-11 16:05:58
我们破大肠杆菌根本不用溶菌酶，直接破就可以了

请问大肠杆菌的破壁条件是什么？
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9楼2018-08-28 11:11:48
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