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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 核酸PAGE电泳每次制胶灌胶后等一会儿就会出现树枝状的气泡，求解！！！
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刘姐不吃地瓜

木虫 (初入文坛)

[求助] 核酸PAGE电泳每次制胶灌胶后等一会儿就会出现树枝状的气泡，求解！！！ 已有6人参与

如题：核酸PAGE电泳每次制胶灌胶后等一会儿就会出现树枝状的气泡，求解！！！
          20%的胶，貌似一聚合体积就缩小了，所以出现了气泡？
          真心不知为何啊，实验卡在这里一周了，制不好胶！求诸位指导！
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1楼 2015-06-08 21:56:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yz2007433052

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
刘姐不吃地瓜: 金币+6, ★★★很有帮助 2015-06-12 08:13:44
这个很正常，我也出现过这个现象，是因为在制胶刚开始的时候胶凝结的太快太猛了，我觉得有三种办法可以控制（最好一个一个改进，不要同时试），第一，改用小胶，平常用的都是midi胶标准胶，用面积小一些的试一试。第二，将TEMED和APS的量加少一些，可以让胶凝结的慢一些。第三，建议你在加APS合TEMED的时候将前边混合的聚丙烯酰胺等混合溶液在冰箱里边放一会儿，然后再加入催化剂混匀灌胶。还可以降低胶的浓度，自我感觉20%的胶和16%的胶的分离效果差别不大。
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激浪青春！
16楼2015-06-11 19:41:33
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普通回帖

刘姐不吃地瓜

木虫 (初入文坛)
求帮忙！另外凝胶过程感觉到胶体发热，是不是这个原因，怎么处理呢！
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2楼2015-06-09 08:25:15
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soholj

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
20%核酸胶浓度好高啊，没做过这么高的。你可以加热完了，先凉一下再倒，这样可能会好点
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3楼2015-06-09 16:36:20
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刘姐不吃地瓜

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by soholj at 2015-06-09 16:36:20
20%核酸胶浓度好高啊，没做过这么高的。你可以加热完了，先凉一下再倒，这样可能会好点

额，PAGE电泳有加热这一步吗？就是混匀然后就灌胶啦！
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4楼2015-06-09 17:22:42
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匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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5楼2015-06-09 19:23:01
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吹不成调

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是的，浓度太高，我用的8%。
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萌妹智
6楼2015-06-09 20:33:20
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shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我的经验你可以参考一下，能较完美解决你的困惑。
五年前我也遇到过这问题。
首先AP这类的助凝剂稍微少加一点点。
然后准备一个干净的塑料的薄薄的长长的宽度窄窄的长条（就像你制胶的梳子一样）用于在灌胶后插进去赶气泡用，去除胶中的气泡神器。
再者一小时内经常观察胶，要是胶底缩胶了就用一毫升移液器慢慢的往里吹点胶即补胶。
再者或半或一小时后即使把制好的胶用保鲜膜完全包裹起来当四度。
最后随时用随时取出，就能用。

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7楼2015-06-09 22:54:34
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刘姐不吃地瓜

木虫 (初入文坛)
内容已删除
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8楼2015-06-10 08:31:55
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刘姐不吃地瓜

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 吹不成调 at 2015-06-09 20:33:20
是的，浓度太高，我用的8%。

主要我需要区分不同长度的核酸（相差15个碱基），而看说明貌似20%的浓度才能得到有效区分，所以木有办法啊！
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9楼2015-06-10 08:36:01
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刘姐不吃地瓜

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2015-06-09 19:23:01
PAGE20%太高了  要是没什么特殊用途就12%或者8%都可以，电泳发热正常，电泳液用久了就这样，蛋白电泳不都是冷却嘛 没事的。

主要我需要区分不同长度的核酸（相差15个碱基），而看说明貌似20%的浓度才能得到有效区分，所以木有办法啊！
另外我是凝胶过程中胶体发热，不是电泳啦，嘿嘿~
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10楼2015-06-10 08:37:30
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