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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 合成表征 » 关于葡萄糖检测的问题
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lo@丹丹@ve

金虫 (小有名气)

[求助] 关于葡萄糖检测的问题 已有1人参与

各位虫友，你们在做葡萄糖检测时，用的是我们平常用的D型葡萄糖吗？还是经过什么处理，最近在做葡萄糖的检测，但是增大葡萄糖的浓度，但是反应溶液还是不变色，求指点。
我是将葡萄糖溶解在磷酸缓冲溶液中，然后加入葡萄糖氧化酶，37℃，保温1h，然后加入醋酸缓冲溶液、TMB、催化剂，继续搅拌，但是溶液就是不变色，这是什么原因呢？
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在实现理想的道路上，遇到挫折在所难免，但是只要不放弃，就一定可以实现心中的梦想。
1楼 2015-06-02 22:23:24
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雨梦无声

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lo@丹丹@ve at 2015-06-08 16:33:36
我的催化剂的确是铁基的，但是在第一步产生过氧化氢的实验中，文献中提到要在磷酸缓冲溶液中进行，但是加的量很少，只有100微升，然后再显色的时候是加入的醋酸缓冲溶液3ml。而且文献中有报道，如果直接用醋酸缓冲 ...

那个文献下了不知道扔去哪了，文献太多太杂，找不到了不好意思，我记得好像是RSC分析方法的，你可以去搜一下，是杨秀荣老师用四氧化三铁测磷酸根的。我当时也是用PBS配的，但是我催化剂不是铁基的没考虑。我保持酶是这样的：干粉直接保存-20°就可以了，一旦溶解后我会分装成若干份，也是保存在-20°，然后每次用都是用完其中一份再用另一份，这样可以避免反复冻融导致酶活降低。还有就是溶了尽快做完。
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6楼2015-06-08 16:51:46
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雨梦无声

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lo@丹丹@ve: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-06-08 18:37:47
肯定不变色啦，葡萄糖氧化酶分解葡萄糖的产物是什么？是过氧化氢和葡萄糖醛酸，双氧水并不能氧化TMB，要氧化TMB必须要把产生的过氧化氢转变成氧化能力更强的羟基自由基，那如何转变？经典的是引入HRP，时髦的有纳米酶，比如严老师07年在Nature子刊上发表的四氧化三铁具有HRP活性。
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2楼2015-06-07 17:42:07
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lo@丹丹@ve

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 雨梦无声 at 2015-06-07 17:42:07
肯定不变色啦，葡萄糖氧化酶分解葡萄糖的产物是什么？是过氧化氢和葡萄糖醛酸，双氧水并不能氧化TMB，要氧化TMB必须要把产生的过氧化氢转变成氧化能力更强的羟基自由基，那如何转变？经典的是引入HRP，时髦的有纳米 ...

我是有加入催化剂的，上面有写的，我的催化剂做过累过氧化酶实验，是可以过氧化氢转化为羟基自由基的，我在考虑在是不是在产生过氧化氢的过程中需要避光啊，是不是不避光的话，产生的过氧化氢就会被分解掉呢？求指点
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在实现理想的道路上，遇到挫折在所难免，但是只要不放弃，就一定可以实现心中的梦想。
3楼2015-06-08 16:04:18
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雨梦无声

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lo@丹丹@ve at 2015-06-08 16:04:18
我是有加入催化剂的，上面有写的，我的催化剂做过累过氧化酶实验，是可以过氧化氢转化为羟基自由基的，我在考虑在是不是在产生过氧化氢的过程中需要避光啊，是不是不避光的话，产生的过氧化氢就会被分解掉呢？求指 ...

不好意思，马大哈没看到你说了催化剂。我觉得不需要太在意避光是否，我做的时候能测出来就是普通的白色小离心管水浴锅水浴能显色。我觉得有几点值得考虑，一，你用来产生羟基自由基的催化剂是否铁基？是的话用磷酸缓冲液可能有影响，因为根据杨秀荣老师有关报道磷酸根会抑制四氧化三铁的活性，你的催化是否有类似情况，可以考虑换醋酸缓冲液。二，是否葡萄糖氧化产生双氧水的时候体积较大，导致在下一步氧化TMB显色的时候加入的酸性缓冲液的pH超出最佳的催化条件，也就是说第一步溶液体积过大，后面再加酸溶液根本就没达到pH 4.0左右的最佳催化条件。三，第二步的显色催化仍让需要37°左右水浴。
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4楼2015-06-08 16:22:30
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