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wosudongyang铜虫 (初入文坛)
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小球藻中酶活的测定 已有1人参与
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小弟在尝试测定小球藻中光合作用相关酶的一些酶活，目前有： 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(EC 2.7.7.9) 苹果酸脱氢酶 葡萄糖—6—磷酸脱氢酶 这三种一直没有结果； 我测定方法基本就是离心取藻泥，ddH2O 洗涤，液氮研磨，最后按照《工具酶的活力测定》书上的步骤测定， 可是结果都是没有酶活体现，酶反应曲线根本没有变化，不知是何原因？  |
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wosudongyang
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5楼2015-06-01 14:22:50
calorimetry
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2楼2015-06-01 12:49:15
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提取应该没问题吧，别的还有几种酶能测出来，步骤的话是： 1. 加Tris-HCl缓冲液 2. 加MgCl2溶液 3. 加NADP+溶液 4. 加尿嘧啶核苷-5’-二磷酸葡萄糖溶液 5. 加a-葡萄糖磷酸变位酶溶液 6. 加葡萄糖—6—磷酸脱氢酶溶液 7. 加入待测液（空白管加纯水） 8. 迅速加入无机焦磷酸盐溶液， 立即混匀开始计时 在30℃恒温条件下，如上表加试剂，反应总体积为1.0ml。然后使用紫外分光光度计，选择波长未340nm，测定光吸收值。以纯水校正光吸收到0点，每隔半分钟读取各管光吸收（A），共读3min，以A对时间作图，取反应最初线性部分，计算出每分钟A的增加值为ΔA340nm/分=ΔA样/分-Δ空/分 |
3楼2015-06-01 14:11:52
calorimetry
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【答案】应助回帖
| 我初步看，好像还没有明显的问题。你适当调整一下酶的反应温度和适当温和操作混合一下酶和底物，并且改变酶的浓度。我今天我这里没有带酶的活性测定手册，我明天查一下实验手册。 |
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4楼2015-06-01 14:21:17
