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wosudongyang

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[求助] 小球藻中酶活的测定已有1人参与

小弟在尝试测定小球藻中光合作用相关酶的一些酶活，目前有：
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(EC 2.7.7.9)
苹果酸脱氢酶
葡萄糖—6—磷酸脱氢酶
这三种一直没有结果；
我测定方法基本就是离心取藻泥，ddH2O 洗涤，液氮研磨，最后按照《工具酶的活力测定》书上的步骤测定，
可是结果都是没有酶活体现，酶反应曲线根本没有变化，不知是何原因？

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1楼2015-05-30 11:15:53

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calorimetry

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

酶反应曲线根本没有变化，或者是酶的提取有问题，导致了酶的失活，或者是底物不合格，还有就是检测仪器的问题，希望你详细些说一下，我们可以讨论。

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2楼2015-06-01 12:49:15

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wosudongyang

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引用回帖:

2楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-01 12:49:15
酶反应曲线根本没有变化，或者是酶的提取有问题，导致了酶的失活，或者是底物不合格，还有就是检测仪器的问题，希望你详细些说一下，我们可以讨论。

提取应该没问题吧，别的还有几种酶能测出来，步骤的话是：
1. 加Tris-HCl缓冲液
2. 加MgCl2溶液
3. 加NADP+溶液
4. 加尿嘧啶核苷-5’-二磷酸葡萄糖溶液
5. 加a-葡萄糖磷酸变位酶溶液
6. 加葡萄糖—6—磷酸脱氢酶溶液
7. 加入待测液（空白管加纯水）
8. 迅速加入无机焦磷酸盐溶液，
立即混匀开始计时
在30℃恒温条件下，如上表加试剂，反应总体积为1.0ml。然后使用紫外分光光度计，选择波长未340nm，测定光吸收值。以纯水校正光吸收到0点，每隔半分钟读取各管光吸收（A），共读3min，以A对时间作图，取反应最初线性部分，计算出每分钟A的增加值为ΔA340nm/分=ΔA样/分-Δ空/分

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3楼2015-06-01 14:11:52

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