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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 求助transwell种细胞数
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amily_zxr

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助transwell种细胞数 已有1人参与

我是用的transwell corning3460，小室底面积1.12cm2（和24孔大小一样），孔径0.4um。
用大鼠的BMSC做诱导成骨，测RT-PCR。我是将细胞种到小室中，不让它迁移，小室下面放我的材料做释放。第一次种了40万/孔，发现到第三天收样时细胞全卷起来了死掉了，老师说种的太密了。第二次种30万/孔，还是卷。
求助各位大侠有没有建议种多少细胞数目比较合适？既要保证细胞数目能够满足pcr模板的量，又不至于长得太密细胞死掉。
跪求哇~
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1楼 2015-05-28 18:30:55
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们公司一直在肿瘤方面得研究，transwell也经常做，用的也是corning的小室，一般来说是上室铺5万/孔，楼主铺的细胞量太大，细胞都饿死了，根据细胞的特性不同，会24小时，48小时捞出小室看看细胞有没有透膜转移，注意铺板时小室内外两层培养基的选择性
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2楼2015-05-29 09:15:34
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amily_zxr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-05-29 09:15:34
我们公司一直在肿瘤方面得研究，transwell也经常做，用的也是corning的小室，一般来说是上室铺5万/孔，楼主铺的细胞量太大，细胞都饿死了，根据细胞的特性不同，会24小时，48小时捞出小室看看细胞有没有透膜转移，注 ...

非常感谢！但是我怕细胞数太少了，提出的DNA模板量少PCR测不出来。而且我直接用24孔板做成骨诱导的时候，每个孔也得铺个30万左右，也没出现死亡的现象呀
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3楼2015-06-03 22:40:40
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