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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » Caco-2培养在Transwell里面电阻值长到很大之后，又开始降低，为什么？
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沙伯略

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[求助] Caco-2培养在Transwell里面电阻值长到很大之后，又开始降低，为什么？ 已有2人参与

养过Caco-2并接种过Transwel的战友，请帮帮我~~~如题，我把Caco-2细胞以2*10^5/ml的密度接种到Transwell培养板（每个transwel板接种0.5ml，Corning3460，孔径0.4um，直径12mm），第1、3、5、7、11、17、19、21天测量跨膜电阻抗值。。。发现电阻值在第11天已达到1500Ω，但是，之后，随着培养时间的增加，第17、19、21天，电阻值又开始降低，一直从1500降到1200，又讲到900多，有的甚至降到500多。请问老师们：这是由于接种浓度过大导致的吗？还是由于有污染呢？还是由于其它的原因呢？？？
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1楼 2014-06-09 18:18:48
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绿色杯子

银虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 沙伯略 at 2014-06-13 22:24:54
电阻计用的是milipore的，比较小，所以一直放在超净工作台里面的，每次使用之前照紫外，而且用75%乙醇浸泡电极15min了，应该没问题，并且，是某几个孔的电阻先下降，后来的都下降了，之后一般达到500-700Ω，又开始 ...

1.你的孔板更换了吗？我用的24孔板，换液的时候连板也换掉的。下室里容易长菌，那种团块状的，染菌的孔电阻值很低，就那种1，2,300的样子。
2.我换液不用枪的，用玻璃的那种巴斯管，这个换液的时候冲击力比较小。保证没有把膜弄破的话，你那个板子多大的呢？我用的底面积0.33cm2的transwell就是可以挂到24孔板上的，换液上室大约400ul，下室1ml。接种密度1~2*10^5.你换液是每天换还是隔天换的？是不是你的细胞太多，培养液不够用啊？换液的时候培养基什么色的啊？
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9楼2014-06-14 20:01:53
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绿色杯子

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
沙伯略: 金币+19, ★★★很有帮助 2014-06-13 22:15:19
是不是你换液的时候把底部长的细胞单层膜弄坏了？细胞太多的话会爬到transwell的壁上
培养液隔天换的话什么颜色？换液的时候有浓重的怪味吗？
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4楼2014-06-13 10:55:55
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沙伯略

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13楼: Originally posted by feizaiyey at 2014-06-25 10:02:41
楼组，我记得你之前的TEER很低，请问下你是如何提高你的TEER的啊~~~

换了一株细胞就上去了，估计是上次那株细胞的代数太靠后了~
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14楼2014-06-25 23:22:34
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沙伯略

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大虫们请不吝赐教啊！！！
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2楼2014-06-10 23:14:53
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liupeng0215

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你后面换液怎么换的啊
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沙伯略
3楼2014-06-13 10:03:55
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绿色杯子

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【答案】应助回帖

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沙伯略: 金币+17, ★★★很有帮助 2014-06-13 22:19:55
对了，还有你的电阻计保证无菌吗？因为我以前养的时候被染菌过，就是因为电阻计染菌，然后一个多月浪费掉
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5楼2014-06-13 10:59:59
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沙伯略

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4楼: Originally posted by 绿色杯子 at 2014-06-13 10:55:55
是不是你换液的时候把底部长的细胞单层膜弄坏了？细胞太多的话会爬到transwell的壁上
培养液隔天换的话什么颜色？换液的时候有浓重的怪味吗？

您好，首先多谢您的回复！换液的时候，下室1.5lm，我换了1ml。上室0.5ml，我用200ul的枪头换取两次共计0.4ml培养液。每次都小心翼翼的，因此我排除是枪头把单层膜弄坏的情况。现在怀疑是接种密度太大的缘故，不知道你意下如何？（我的接种浓度是4*10^5个/ml）
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6楼2014-06-13 22:19:21
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沙伯略

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5楼: Originally posted by 绿色杯子 at 2014-06-13 10:59:59
对了，还有你的电阻计保证无菌吗？因为我以前养的时候被染菌过，就是因为电阻计染菌，然后一个多月浪费掉

电阻计用的是milipore的，比较小，所以一直放在超净工作台里面的，每次使用之前照紫外，而且用75%乙醇浸泡电极15min了，应该没问题，并且，是某几个孔的电阻先下降，后来的都下降了，之后一般达到500-700Ω，又开始慢慢的升，但上升后一般不超过1000Ω，远未恢复到之前最高的1800Ω左右。如果是污染，应该是急剧下降，至零吧？当然，也有的孔一直讲到零（减去空白得到的值）。不知道大侠还有其他的原因没？
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7楼2014-06-13 22:24:54
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沙伯略

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3楼: Originally posted by liupeng0215 at 2014-06-13 10:03:55
你后面换液怎么换的啊

部分换液~
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8楼2014-06-13 22:25:42
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沙伯略

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9楼: Originally posted by 绿色杯子 at 2014-06-14 20:01:53
1.你的孔板更换了吗？我用的24孔板，换液的时候连板也换掉的。下室里容易长菌，那种团块状的，染菌的孔电阻值很低，就那种1，2,300的样子。
2.我换液不用枪的，用玻璃的那种巴斯管，这个换液的时候冲击力比较小。 ...

我用的是12孔板，Corning3460，孔径0.4um，直径12mm。上室0.5ml，下室1.5ml。可是我找不到长菌的理由啊~电阻仪一直在超净台内，每次用之前75%乙醇浸泡擦拭。换也是每天换的~电阻比较小的孔，培养基确实明显比其他的孔更黄~
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10楼2014-06-15 23:36:44
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