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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切问题
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yydr

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切问题 已有6人参与

为什么我的pet载体与目的片段经双酶切后与目的片段连接，竟然是空载体？双酶切后不是不容易出现空载吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-05-28 15:46:43
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yydr

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-05-30 01:02:25
很明显自连是载体上只切了一刀，另一刀没及时切上所致。
建议:
1 把两个酶的说明书拿出来看看分析一下相应buffer下哪个酶效率低一些可适当增加酶量，同时适当延长切割时间。
2 在你们实验室找一找有没有已经在你 ...

嗯嗯，这次已经增长时间了，有个问题还想请教，就是为什么我把酶连好的产物先转dh5a,提质粒后再转bl21,再提质粒就是很多条条带呢

[ 发自小木虫客户端 ]
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14楼2015-05-30 09:17:22
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-05-28 20:58:39
双酶切也会有酶切不完全的情况，出现空载体也是有可能的，建议你酶切的量稍微少点，然后酶切的时间稍微啦长点，再切胶回收。
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2楼2015-05-28 15:55:04
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-05-28 20:58:47
酶切不完全导致的，这是完全可能的。
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3楼2015-05-28 17:01:41
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yydr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a13515517892 at 2015-05-28 15:55:04
双酶切也会有酶切不完全的情况，出现空载体也是有可能的，建议你酶切的量稍微少点，然后酶切的时间稍微啦长点，再切胶回收。

量少容易回收回来的太暗啊，

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-05-28 22:08:09
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